Kľúčový rozdiel medzi FPLC a HPLC je v tom, že FPLC je typ kvapalinovej chromatografie, ktorá čistí veľké biomolekuly, ako sú proteíny, nukleotidy a peptidy, zatiaľ čo HPLC je typ kvapalinovej chromatografie, ktorá oddeľuje zlúčeniny s nízkou molekulovou hmotnosťou.
Kvapalinová chromatografia je technika používaná na oddelenie vzorky na jej jednotlivé zložky. K tejto separácii dochádza v dôsledku interakcie špecifických vzoriek s mobilnou a stacionárnou fázou. Zložky vo vzorke sú oddelené na základe afinity každej zložky k mobilnej fáze v kvapalinovej chromatografii. Keď mobilná fáza a vzorka prechádzajú kolónou, zložky vzorky sa začnú oddeľovať do pásov, ktoré je možné detegovať UV-VIS spektroskopiou. Preto sú FPLC a HPLC dva typy techník kvapalinovej chromatografie.
Čo je FPLC?
FPLC je typ kvapalinovej chromatografie, ktorá čistí veľké biomolekuly, ako sú proteíny, nukleotidy a peptidy. Rýchla proteínová kvapalinová chromatografia (FPLC) bola prvýkrát vyvinutá a uvedená na trh vo Švédsku spoločnosťou Pharmacia v roku 1982. Často sa používa na analýzu alebo čistenie proteínových zmesí. Toto prebieha na princípe afinity zložiek vzorky k pohybujúcej sa tekutine (mobilná fáza) a poréznemu tuhému materiálu (stacionárna fáza). Vo FPLC je mobilná fáza pufor a stacionárna fáza je živica zložená z guľôčok. Zvyčajne pozostáva zo zosieťovanej agarózy naplnenej do valcovej sklenenej alebo plastovej kolóny.
Obrázok 01: Prístroj FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography)
Vo väčšine stratégií FLPC sa používa iónomenič. Preto sa požadovaný proteín bude viazať na živicu prostredníctvom nábojovej interakcie. Technika FLPC tiež používa dva pufre: pufor 1 (bežiaci pufor) a pufor 2 (elučný pufor). Spočiatku, keď tlmivý roztok a zmes vzorky prechádzajú kolónou, proteín, ktorý je predmetom záujmu v zmesi, sa naviaže na živicu prostredníctvom interakcie náboja. Požadovaný proteín sa však disociuje a vracia sa do roztoku v elučnom pufri, keď elučný pufor prechádza kolónou na konci procesu. Neskôr roztok (eluant, ktorý obsahuje sledovaný proteín) prechádza cez dva detektory, ktoré merajú koncentráciu soli a koncentráciu proteínu. Keď sa každý proteín eluuje, počas detekcie sa javí ako „vrchol“a môže sa zozbierať na ďalšie použitie.
Čo je HPLC?
HPLC je typ kvapalinovej chromatografie, ktorá oddeľuje zlúčeniny s nízkou molekulovou hmotnosťou. V roku 1969 bola prvá HPLC komerčne vyrobená spoločnosťou Waters Corporation, USA. Pri vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografii (HPLC) sa zmes vzorky (analyt) v rozpúšťadle (mobilná fáza) čerpá pri vysokom tlaku cez kolónu s chromatografickou náplňou (stacionárna fáza). Zmes vzorky je unášaná pohybujúcim sa prúdom nosného plynu hélia alebo dusíka.
Obrázok 02: HPLC (vysokoúčinná kvapalinová chromatografia)
Zložky v zmesi vzoriek, ktoré majú najmenšiu mieru interakcie so stacionárnou fázou alebo najväčšiu mieru interakcie s mobilnou fázou, rýchlejšie opustia kolónu. Na druhej strane zložky v zmesi vzoriek, ktoré majú najväčšiu interakciu so stacionárnou fázou alebo najmenšiu mieru interakcie s mobilnou fázou, budú opúšťať kolónu pomalšie. Na základe vyššie uvedeného princípu interakcie je možné oddeliť zložky zmesi vzoriek. Okrem toho detektor prístroja identifikuje každú zložku zmesi vzorky, ktorá opúšťa kolónu. HPLC sa používa na kontrolu environmentálnych a biologických vzoriek na prítomnosť alebo neprítomnosť známych zlúčenín, ako sú lieky, toxíny alebo pesticídy. Používa sa v rôznych odvetviach, ako je farmaceutický, environmentálny, forenzný a chemický priemysel.
Aké sú podobnosti medzi FPLC a HPLC?
- FPLC a HPLC sú typy kvapalinovej chromatografie.
- Obe sa používajú na oddelenie a identifikáciu biologických vzoriek.
- Majú tekutú mobilnú fázu a pevnú stacionárnu fázu.
- Obe techniky používajú na prechod cez vzorku stĺpec.
- Tieto techniky využívajú pumpy, detektory, ventily a softvér na separáciu a detekciu vzoriek.
Aký je rozdiel medzi FPLC a HPLC?
FPLC je typ kvapalinovej chromatografie, ktorý sa používa na čistenie veľkých biomolekúl, ako sú proteíny, nukleotidy a peptidy. HPLC je typ kvapalinovej chromatografie, ktorý sa používa na separáciu zlúčenín s nízkou molekulovou hmotnosťou. Toto je kľúčový rozdiel medzi FPLC a HPLC. Okrem toho FPLC používa monitory pH a vodivosti, ako aj zberače frakcií. Na rozdiel od toho HPLC nepoužíva monitory pH a vodivosti a zberače frakcií.
Nasledujúca infografika uvádza ďalšie rozdiely medzi FPLC a HPLC v tabuľkovej forme.
Zhrnutie – FPLC vs HPLC
Chromatografia je laboratórna analytická technika používaná na separáciu zložiek zo zmesi. Delí sa na niekoľko typov, ako je stĺpcová chromatografia, plynová chromatografia, kvapalinová chromatografia, iónovo-výmenná chromatografia atď. FPLC a HPLC sú dva typy techník kvapalinovej chromatografie. FPLC je typ kvapalinovej chromatografie, ktorý sa používa na čistenie veľkých biomolekúl, ako sú proteíny, nukleotidy a peptidy. Na druhej strane, HPLC je typ kvapalinovej chromatografie, ktorý sa používa na separáciu zlúčenín s nízkou molekulovou hmotnosťou. Toto je súhrn toho, aký je rozdiel medzi FPLC a HPLC.
