Kľúčový rozdiel medzi HPLC a rýchlou HPLC je v tom, že tlak čerpadla, ktorý používame pre HPLC, je okolo 40 MPa, zatiaľ čo tlak čerpadla pre rýchlu HPLC je okolo 3-5 MPa.
Najbežnejšou technikou, ktorú používame na separáciu zložiek zmesi, je „kvapalinová chromatografia“. Existuje niekoľko techník na dosiahnutie tohto účelu, z ktorých je HPLC veľmi populárna. HPLC je skratka pre High Performance Liquid Chromatography, ktorá identifikuje, kvantifikuje a oddeľuje zložky kvapalnej zmesi rýchlym a efektívnym spôsobom. Rýchla HPLC je špeciálna aplikácia HPLC, ktorá nedávno upútala pozornosť tých, ktorí sa zaoberajú štúdiom roztokov.
Čo je HPLC?
HPLC je vysokoúčinná kvapalinová chromatografia. Využíva vysoký tlak na vytlačenie rozpúšťadiel tak, aby prešli kolónou. Je to tiež ideálny spôsob, ako oddeliť a študovať rôzne zlúčeniny, ako sú aminokyseliny, nukleové kyseliny, sacharidy, steroidy, antibiotiká a uhľovodíky. HPLC má mnoho výhod oproti iným metódam separácie zmesí, ako je vyššie rozlíšenie a rýchlejšia analýza. Odstraňuje potrebu prebaľovania a regenerácie a ponúka lepšiu kontrolu nad parametrami a tým zvyšuje účinnosť separácie. V ideálnom prípade je HPLC vhodná pre aplikácie vo veľkom meradle, pretože dokáže oddeliť veľmi malé častice a umožňuje použitie vysokých tlakov, ktoré uľahčujú ľahký tok rozpúšťadiel.
Obrázok 01: HPLC stĺpec
V skratke, spôsob fungovania techniky HPLC je nasledujúci. Najprv by sme mali zaviesť vzorku do prúdu mobilnej fázy v malých malých množstvách pomocou pumpy. Tlak čerpadla by sa mal udržiavať na 40 MPa. Tento prúd mobilnej fázy perkoluje cez kolónu HPLC. Potom zložky vo vzorke tiež prechádzajú cez kolónu. Ich rýchlosti pohybu sa však navzájom líšia v dôsledku rozdielu v interakciách medzi zložkami vzorky a adsorbentom vo vnútri kolóny. Tento adsorbent nazývame ako stacionárna fáza, pretože sa nachádza vo vnútri kolóny (nepohybuje sa). Potom, na konci kolóny, môžeme odobrať vzorku, ktorá sa uvoľňuje z kolóny, čím môžeme zbierať zložky vo vzorke oddelene.
Čo je rýchla HPLC?
Vedci výskumu vo výskumnom ústave Schering Plow nedávno vyvinuli techniku rýchlej HPLC, ktorá je pokročilou verziou HPLC, pretože umožňuje ešte rýchlejšie oddelenie zlúčenín zo zmesi. Táto technika, známa aj ako rýchla HPLC, využíva 2,7 um tavené jadrové častice oxidu kremičitého, ktoré sa vyrábajú tavením 0,5 μm porézneho oxidu kremičitého na častice pevného oxidu kremičitého. Tieto jedinečne vyrobené častice robia proces separácie veľmi rýchlym a to aj pri nízkom protitlaku, ako používame pri HPLC.
Obrázok 02: Prístroj FPLC
Rýchla HPLC dosahuje výsledky porovnateľné s UPLC, ale vedci sa domnievajú, že táto technika je lepšia, pretože nevyžaduje veľmi drahé ultravysokotlakové zariadenie. Skvelé je, že rýchla HPLC nevyžaduje žiadne nové laboratórne protokoly.
Aký je rozdiel medzi HPLC a Fast HPLC?
HPLC je vysokoúčinná kvapalinová chromatografia a rýchla HPLC je pokročilá forma vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie. Kľúčový rozdiel medzi HPLC a rýchlou HPLC je v tom, že tlak čerpadla, ktorý používame na HPLC, je okolo 40 MPa. Zatiaľ čo tlak čerpadla pre rýchlu HPLC je okolo 3-5 MPa. Okrem toho môžeme pomocou techniky HPLC separovať rôzne zlúčeniny, ako sú aminokyseliny, nukleové kyseliny, sacharidy, steroidy, antibiotiká a uhľovodíky, zatiaľ čo technika rýchlej HPLC sa používa hlavne na separáciu proteínov.
Nižšie uvedená infografika predstavuje viac informácií o rozdieloch medzi HPLC a rýchlou HPLC.
Zhrnutie – HPLC verzus rýchla HPLC
HPLC je technika kvapalinovej chromatografie, ktorá sa stala veľmi populárnou po celom svete. Rýchla HPLC je nová verzia HPLC, vedci z Schering Plow Institute vyvinuli túto novú techniku. Kľúčový rozdiel medzi HPLC a rýchlou HPLC spočíva v tlaku čerpadla, ktorý používame na separáciu. To znamená; tlak čerpadla, ktorý používame na HPLC, je okolo 40 MPa. Tlak čerpadla pre rýchlu HPLC je však okolo 3-5 MPa.
