Kľúčový rozdiel medzi HPLC a UPLC je v tom, že HPLC umožňuje analýzu častíc s veľkosťou okolo 5 mikrometrov, zatiaľ čo UPLC umožňuje oveľa menšie častice okolo 2 mikrometrov.
HPLC a UPLC sú techniky kvapalinovej chromatografie, ktoré sú užitočné pri separácii zložiek zlúčeniny. Aby sme poznali rozdiel medzi HPLC a UPLC, musíme najprv vedieť, čo je to HPLC. Je to preto, že UPLC je špeciálna verzia HPLC a môžeme ju ľahko pochopiť, ak vieme, čo je HPLC.
Čo je HPLC?
Pojem HPLC znamená High Performance Liquid Chromatography. Je to technika, ktorú môžeme použiť na oddelenie rôznych zložiek zlúčeniny. Je to tiež najpoužívanejšia technika na identifikáciu, kvantifikáciu a oddelenie zložiek zmesi. Okrem toho táto technika využíva vysoký tlak na pretláčanie rozpúšťadiel cez kolónu. Okrem toho sú hlavné aplikácie HPLC v biochémii na analýzu zložiek zlúčeniny. Je to ideálny spôsob separácie a identifikácie aminokyselín, nukleových kyselín, bielkovín, uhľovodíkov, pesticídov, sacharidov, antibiotík, steroidov a nespočetných ďalších anorganických látok.
Obrázok 01: Systém HPLC v laboratóriu
V skratke, spôsob fungovania techniky HPLC je nasledujúci. Najprv by sme mali zaviesť vzorku do prúdu mobilnej fázy v malých malých množstvách pomocou pumpy. Tlak čerpadla by sa mal udržiavať na 40 MPa. Potom tento prúd mobilnej fázy perkoluje cez kolónu HPLC. Tiež zložky vo vzorke prechádzajú cez kolónu. Ich rýchlosti pohybu sa však navzájom líšia. Tento rozdiel vzniká v dôsledku rozdielu v interakciách medzi zložkami vzorky a adsorbentom vo vnútri kolóny. Tento adsorbent nazývame ako stacionárna fáza, pretože sa nachádza vo vnútri kolóny (nepohybuje sa). Po druhé, na konci kolóny môžeme odobrať vzorku, ktorá sa eluuje z kolóny. Tam môžeme určiť rozdiely v retenčných časoch pre každú zložku vo vzorke.
Čo je UPLC?
Pojem UPLC znamená ultra vysokovýkonnú kvapalinovú chromatografiu. Je to variácia HPLC, ale spôsob fungovania je rovnaký. Na rozdiel od HPLC však táto metóda umožňuje analyzovať veľmi malé častice, ako napríklad 2 mikrometrové malé častice.
Obrázok 02: Zariadenie UPLC
Navyše poskytuje rýchlejšiu analýzu. Pri tejto technike používame na vloženie vzorky do kolóny tlak čerpadla 100 MPa. Tento vysoký tlak teda potvrdzuje, že celá vzorka je zavedená do kolóny. V porovnaní s HPLC je to teda veľmi efektívne.
Aký je rozdiel medzi HPLC a UPLC?
Pojem HPLC znamená High Performance Liquid Chromatography, zatiaľ čo termín UPLC znamená Ultra High Performance Liquid Chromatography. Preto je technika UPLC vyvinutou verziou HPLC. Spôsob činnosti je teda rovnaký pre obe techniky. UPLC je však v porovnaní s HPLC účinnejšia, pretože využíva vysoký tlak čerpadla; tlak čerpadla pre HPLC je 40 MPA, zatiaľ čo pre UPLC je 100 MPa. Preto je to rozdiel medzi HPLC a UPLC. Kľúčovým rozdielom medzi HPLC a UPLC je predovšetkým to, že HPLC umožňuje analýzu častíc s veľkosťou okolo 5 mikrometrov, zatiaľ čo UPLC umožňuje oveľa menšie častice okolo 2 mikrometrov.
Zhrnutie – HPLC vs UPLC
UPLC je forma HPLC. Spôsoby operácie sú teda rovnaké. V UPLC však môžeme nájsť niektoré vylepšené funkcie v porovnaní s HPLC. Preto existuje určitý rozdiel medzi HPLC a UPLC. Kľúčový rozdiel medzi HPLC a UPLC je však v tom, že HPLC umožňuje analýzu častíc s veľkosťou okolo 5 mikrometrov, zatiaľ čo UPLC umožňuje oveľa menšie častice okolo 2 mikrometrov.
