Kľúčový rozdiel medzi RP HPLC a HIC je v tom, že RP HPLC využíva polárnejšiu mobilnú fázu a menej polárnu stacionárnu fázu. Zatiaľ čo HIC používa hydrofóbnu stacionárnu fázu, ktorá umožňuje hydrofóbnym molekulám pripojiť sa k nej.
Chromatografia je analytická technika, ktorá pomáha rozdeliť zmes na jej zložky. Najprv musíme rozpustiť vzorku, ktorá sa má rozdeliť, na roztok. Táto zmes roztok-látka sa nazýva mobilná fáza. Potom mobilná fáza prechádza cez iný materiál nazývaný stacionárna fáza. Stacionárna fáza určuje oddelenie zložiek. K separácii dochádza v dôsledku rozdeľovania materiálu medzi mobilnú fázu a stacionárnu fázu.
Čo je RP HPLC?
Pojem RP HPLC znamená vysokovýkonnú kvapalinovú chromatografiu s reverznou fázou. Zahŕňa oddelenie zložiek v zmesi podľa hydrofóbnosti. Hydrofóbne zložky v mobilnej fáze sa spájajú s imobilizovanými hydrofóbnymi ligandami na stacionárnej fáze, zatiaľ čo hydrofilné zložky sa eluujú cez stacionárnu fázu bez toho, aby sa pripojili k povrchu stacionárnej fázy.
Obrázok 01: Prístroj HPLC
Táto metóda má navyše väčšiu reprodukovateľnosť v porovnaní s inými chromatografickými technikami a tiež vykazuje širokú použiteľnosť. Preto túto metódu používame v laboratóriách pri viac ako 75 % všetkých metód HPLC. Ako mobilnú fázu väčšinou používame vodnú zmes vody s miešateľným polárnym organickým rozpúšťadlom. Zabezpečí tak prichytenie hydrofóbnych zložiek v roztoku k povrchu stacionárnej fázy.
Čo je HIC?
Termín HIC znamená hydrofóbnu interakčnú chromatografiu. Ide o typ HPLC s reverznou fázou a táto metóda sa používa najmä na separáciu veľkých biomolekúl, ako sú proteíny. Pri tejto metóde potrebujeme na výrobu vzorky biomolekuly použiť vodné médium. Je to preto, že organické rozpúšťadlá môžu spôsobiť denaturáciu proteínov. Okrem toho táto technika využíva interakciu medzi veľkými molekulami s mierne hydrofóbnym povrchom stacionárnej fázy. Okrem toho musíme vo vzorke použiť vysokú koncentráciu soli, pretože podporuje zadržanie proteínu na obale; tento proces sa nazýva vysolenie. Postupným znižovaním koncentrácie soli môžeme zabezpečiť, aby sa biomolekuly eluovali oddelene podľa ich hydrofóbnosti.
Táto metóda zvyčajne používa podmienky opačné ako pri iónovo-výmennej chromatografii. Pri tejto technike najprv musíme prejsť cez kolónu pufrovým roztokom, aby sme znížili solvatáciu rozpustenej látky vo vzorke. Spôsobuje odhalenie hydrofóbnych oblastí proteínu. Keď je však molekula hydrofóbnejšia, na podporu väzby je potrebné menej soli. Tu sa najskôr eluujú menej hydrofóbne rozpustené látky a podľa zmeny koncentrácie soli sa hydrofóbnejšie rozpustené látky eluujú ako posledné.
Aký je rozdiel medzi RP HPLC a HIC?
Chromatografia je analytická technika na separáciu zložiek v zmesi. RP HPLC a HIC sú dve špecializované chromatografické techniky. Kľúčový rozdiel medzi RP HPLC a HIC je v tom, že RP HPLC používa polárnejšiu mobilnú fázu a menej polárnu stacionárnu fázu, zatiaľ čo HIC používa hydrofóbnu stacionárnu fázu, ktorá umožňuje hydrofóbnym molekulám pripojiť sa k nej.
Nasledujúca infografika sumarizuje rozdiel medzi RP HPLC a HIC.
Súhrn – RP HPLC vs. HIC
Chromatografia je analytická technika na separáciu zložiek v zmesi. RP HPLC a HIC sú dve špecializované chromatografické techniky. Kľúčový rozdiel medzi RP HPLC a HIC je v tom, že RP HPLC používa polárnejšiu mobilnú fázu a menej polárnu stacionárnu fázu, zatiaľ čo HIC používa hydrofóbnu stacionárnu fázu, ktorá umožňuje hydrofóbnym molekulám pripojiť sa k nej.
