Kľúčový rozdiel medzi HPLC s reverznou fázou a HPLC s normálnou fázou je v tom, že HPLC s reverznou fázou používa nepolárnu stacionárnu fázu a polárnu mobilnú fázu, zatiaľ čo HPLC s normálnou fázou používa polárnu stacionárnu fázu a menej polárnu mobilnú fázu.
HPLC s normálnou fázou je najstaršia technika HPLC, ktorú Tswett použil pri separácii rastlinných extraktov; použil kriedu v sklenenom stĺpe. Toto bol klasický spôsob chromatografie, ktorý viedol k jeho pomenovaniu ako „normálna“technika. Na druhej strane HPLC s reverznou fázou je opakom bežnej techniky, ktorú vedci vyvinuli v poslednej dobe.
Čo je to HPLC s reverznou fázou?
HPLC s reverznou fázou je chromatografická technika, pri ktorej používame hydrofóbnu stacionárnu fázu. Spomedzi všetkých metód HPLC používame túto metódu približne na 70 % z dôvodu jej širokej použiteľnosti a reprodukovateľnosti. Stacionárna fáza je nepolárna a mobilná fáza je polárna.
Vedci väčšinou používajú ako mobilnú fázu vodnú zmes vody s miešateľným polárnym organickým rozpúšťadlom, ako je acetonitril alebo metanol. Preto analyty interagujú s nepolárnou stacionárnou fázou.
Čo je HPLC s normálnou fázou?
HPLC s normálnou fázou je chromatografická technika, pri ktorej používame hydrofilnú stacionárnu fázu. Je to tradičná metóda HPLC, aj keď ju až tak nepoužívame. Stacionárna fáza je polárna a mobilná fáza je nepolárna. Ešte dôležitejšie je, že mobilná fáza tejto techniky je 100% organická. Znamená to, že sa na to nepoužíva voda.
Obrázok 01: Profil vzorky pre HPLC chromatogramy na normálnej fáze a na reverznej fáze podľa polarity komponentov v analyte.
Spravidla stacionárna fáza obsahuje oxid kremičitý, kyano, diol, amino viazané fázy atď. Mobilné fázy zahŕňajú organické rozpúšťadlá, ako je hexán, etylacetát atď. Táto technika je založená na zadržiavaní molekúl rozpúšťadla alebo analytu na polárna stacionárna fáza.
Aký je rozdiel medzi HPLC s reverznou fázou a normálnou fázou HPLC?
HPLC s reverznou fázou je chromatografická technika, pri ktorej používame hydrofóbnu stacionárnu fázu. Stacionárna fáza tejto techniky je nepolárna, zatiaľ čo mobilná fáza je polárna. Okrem toho vedci používajú vodnú zmes vody s miešateľným polárnym organickým rozpúšťadlom, ako je acetonitril alebo metanol, ako mobilnú fázu pri HPLC s reverznou fázou. Na rozdiel od toho, HPLC s normálnou fázou je chromatografická technika, v ktorej používame hydrofilnú stacionárnu fázu. Stacionárna fáza tejto techniky je polárna, zatiaľ čo mobilná fáza je nepolárna. Okrem toho vedci používajú organické rozpúšťadlá ako hexán, etylacetát atď. ako mobilnú fázu normálnej fázy HPLC. Nižšie uvedená infografika predstavuje rozdiel medzi HPLC s reverznou fázou a normálnou fázou HPLC v tabuľkovej forme.
Súhrn – reverzná fáza vs. normálna fáza HPLC
Techniky HPLC s reverznou fázou a s normálnou fázou sú dve techniky kvapalinovej chromatografie. Kľúčový rozdiel medzi HPLC s reverznou fázou a HPLC s normálnou fázou je v tom, že HPLC s reverznou fázou používa nepolárnu stacionárnu fázu a polárnu mobilnú fázu, zatiaľ čo HPLC s normálnou fázou používa polárnu stacionárnu fázu a menej polárnu mobilnú fázu.
