Kľúčový rozdiel – HPLC vs HPTLC
Kľúčový rozdiel medzi HPLC a HPTLC je v tom, že HPLC umožňuje kvantitatívnu separáciu zložiek vo vzorke, zatiaľ čo HPTLC neumožňuje kvantitatívnu separáciu zložiek vo vzorke.
Chromatografia je fyzikálna separačná metóda, ktorá sa používa na separáciu a identifikáciu zložiek v zmesi. HPLC aj HPTLC sú chromatografické techniky. HPLC je vysokoúčinná kvapalinová chromatografia. HPTLC je vysokoúčinná tenkovrstvová chromatografia.
Čo je HPLC?
HPLC je vysokoúčinná kvapalinová chromatografia. Je to analytická technika používaná na separáciu, identifikáciu a kvantifikáciu zložiek v zmesi. Pri tejto technike sa vzorka rozpustí vo vhodnom rozpúšťadle. Potom rozpúšťadlo so vzorkou prejde čerpadlom s daným tlakom. Čerpadlo je naplnené pevným adsorpčným materiálom. Potom sa niektoré zložky silne viažu na absorpčný materiál, zatiaľ čo iné zložky sa viažu voľne. To spôsobuje, že komponenty majú rôzne prietoky cez čerpadlo. Preto je možné komponenty ľahko oddeliť.
Obrázok 01: Systém HPLC
Adsorbčný materiál, ktorý plní čerpadlo, je známy ako stacionárna fáza. Rozpúšťadlo s rozpustenou vzorkou je známe ako mobilná fáza. Čerpadlo používané v tejto technike sa nazýva stĺpec. Kolóna je naplnená adsorpčným materiálom, najčastejšie časticami oxidu kremičitého. Veľkosť týchto častíc sa môže pohybovať od 2 do 50 μm. Separačný proces je ovplyvnený zložením mobilnej fázy a teplotou systému. Interakcie medzi stacionárnou fázou a komponentom vo vzorke môžu byť hydrofóbne interakcie, dipól-dipólové interakcie, iónové väzby atď.
Prevádzkový tlak HPLC je podstatne vyšší ako pri tradičnej kvapalinovej chromatografii. Pohybuje sa okolo 50-350 barov. Rozdiel medzi kvapalinovou chromatografiou a HPLC je v tom, že pri kvapalinovej chromatografii vzorka prepadá cez kolónu gravitačne, zatiaľ čo pri HPLC je vzorka natlakovaná cez kolónu. Veľkosť kolóny a častíc absorbentu sú tiež veľmi malé v porovnaní s tradičnou kvapalinovou chromatografiou. Rozlíšenie dané technikou HPLC je však lepšie.
Čo je HPTLC?
HPTLC je vysokoúčinná tenkovrstvová chromatografia. Je to pokročilá a automatizovaná forma tradičnej TLC. Táto technika poskytuje efektívne rozlíšenie v krátkom časovom období. Pri tejto metóde analýzy možno vzorku a referenciu analyzovať súčasne, čo umožňuje porovnanie vzorky s referenciou. Poskytuje lepšiu analytickú presnosť ako iné chromatografické techniky. Čas potrebný na analýzu je kratší. Táto technika je nízkonákladová.
Obrázok 02: Analýza potravinárskych farbív pomocou HPTLC
Metóda HPTLC je jednoduchý proces a tiež odpadá krok prípravy vzorky (v tradičnej TLC je krok prípravy vzorky zahrnutý pred separáciou. Tento krok zahŕňa čistenie a obohatenie). Rozpúšťadlo možno použiť priamo bez akejkoľvek predbežnej úpravy, hoci iné chromatografické techniky vyžadujú predbežnú úpravu, ako je odplynenie, filtrácia atď.
Adsorbčným materiálom používaným pri HPTLC je oxid kremičitý s veľmi malými veľkosťami častíc. V tradičnej TLC je veľkosť častíc oxidu kremičitého 5-20 μm, zatiaľ čo v HPTLC je to 4-8 μm. Vzorka sa aplikuje na HPTLC platňu pomocou aplikátora. Poskytuje jednotnú a bezpečnú aplikáciu. Potom sa platne umiestnia do komory s mobilnou fázou. Komora by mala byť nasýtená parami mobilnej fázy. Po procese HPTLC je možné zistiť miesta, ktoré sa pohli. Pri detekcii škvŕn na platni využíva technika HPTLC vhodnú UV oblasť alebo jódovú komoru.
Aký je rozdiel medzi HPLC a HPTLC?
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC je vysokoúčinná kvapalinová chromatografia. | HPTLC je vysokoúčinná tenkovrstvová chromatografia. |
| Technika | |
| Pri HPLC prechádza mobilná fáza s rozpúšťadlom cez kolónu naplnenú stacionárnou fázou. | Pri HPTLC sa vzorka nanesie na TLC platničku a umiestni sa do komory obsahujúcej mobilnú fázu; potom sa vzorka nechá migrovať na platňu spolu s mobilnou fázou. |
| Measurement | |
| V HPLC sa rozdiely medzi prietokmi zložiek cez kolónu používajú na oddelenie zložiek vo vzorke. | V HPTLC sa rozdiely medzi vzdialenosťami, ktoré prekonali jednotlivé komponenty vo vzorke, používajú na oddelenie komponentov vo vzorke. |
| Kvantitatívne oddelenie | |
| HPLC umožňuje kvantitatívne oddelenie zložiek vo vzorke. | HPTLC neumožňuje kvantitatívne oddelenie zložiek vo vzorke. |
Zhrnutie – HPLC vs HPTLC
HPLC a HPTLC sú dve chromatografické techniky. Kľúčový rozdiel medzi HPLC a HPTLC je v tom, že HPLC umožňuje kvantitatívnu separáciu zložiek vo vzorke, zatiaľ čo HPTLC neumožňuje kvantitatívnu separáciu zložiek vo vzorke.
