Kľúčový rozdiel – priama a nepriama ELISA
Enzýmová imunoanalýza (ELISA), známa aj ako enzýmová imunoanalýza, je sérologický test, ktorý zisťuje protilátky v krvi. Používa sa ako diagnostický nástroj na zistenie, či bol pacient vystavený konkrétnemu typu vírusu alebo inému infekčnému agens (antigénu) a či si telo vytvorilo protilátky proti infekcii. ELISA môže tiež identifikovať minulé a súčasné infekcie. Preto lekári často používajú ELISA ako predbežný skríningový test pred hĺbkovou analýzou chorôb. Toto vyšetrenie je možné vykonať v laboratóriu odberom vzorky krvi od pacienta. Existujú dva typy testov ELISA: priama ELISA a nepriama ELISA. Kľúčový rozdiel medzi priamou a nepriamou ELISA je v tom, že nepriama ELISA je citlivejšia a vyžaduje pridanie sekundárnej protilátky, zatiaľ čo priama ELISA je menej citlivá a používa iba primárnu protilátku.
Čo je priama ELISA?
ELISA je diagnostický test choroby, ktorý sa vykonáva na identifikáciu prítomnosti konkrétnych antigénov alebo protilátok v krvi. Vykonáva sa ako doštičkový test. Používa protilátky spojené s ľahko testovateľnými enzýmami. Prítomnosť antigénov vo vzorke séra sa viaže na špecifické protilátky spojené s enzýmami. V poslednom kroku sa pridá špecifický substrát, aby reagoval s enzýmom. Enzým premieňa substrát na farebný produkt alebo produkt produkujúci signál. Zmena farby v chemickom substráte odhaľuje prítomnosť konkrétnej protilátky vo vzorke séra. Priamy test ELISA používa iba primárnu protilátku spojenú s enzýmom. Po naviazaní na antigén rýchlo mení farbu, čo naznačuje prítomnosť infekčného agens v krvi. Intenzita signálov je však slabšia v priamom teste ELISA, pretože epitopy sú obmedzené na väzbu antigénov. Priama ELISA je preto menej citlivá v porovnaní s nepriamou ELISA.
Obrázok 01: Priamy test ELISA
Čo je nepriama ELISA?
ELISA môže byť vykonaná s použitím dvoch typov protilátok, a to; primárna protilátka a sekundárna protilátka. Nástroj nepriamej ELISA používa oba typy protilátok na amplifikáciu signálov pre lepšiu detekciu. Technika nepriamej ELISA sa vykonáva takto.
- Platničky sa inkubujú s antigénmi a premyjú, aby sa zablokovala nešpecifická väzba.
- Potom sa pridajú primárne protilátky a premyjú sa.
- Pridajú sa sekundárne protilátky spojené s enzýmom a premyjú sa.
- Pridá sa substrát a nechá sa reagovať s enzýmami.
- Zistia sa signály a identifikuje sa prítomnosť alebo neprítomnosť špecifického antigénu vo vzorke.
Pri nepriamom teste ELISA sa niekoľko sekundárnych protilátok môže viazať na jednu primárnu protilátku. Sekundárne protilátky sú spojené s ľahko testovateľnými enzýmami. Preto jedna väzba môže vytvoriť silný signál v dôsledku viac ako jednej interakcie. Nepriama ELISA je teda citlivejšia ako priama ELISA. Nepriama ELISA však môže vytvárať nešpecifické signály v dôsledku krížových reakcií sekundárnych protilátok.
Obrázok 02: Nepriamy test ELISA
Aký je rozdiel medzi priamou a nepriamou ELISA?
Priama verzus nepriama ELISA |
|
| Priama ELISA je menej citlivá v porovnaní s nepriamou ELISA. | Nepriama ELISA je citlivejšia. |
| Čas | |
| Priamy test ELISA je rýchly proces. | Nepriama ELISA je časovo náročná. |
| Použitie protilátok | |
| Pri priamom teste ELISA sa používa iba jeden typ protilátok (primárne protilátky). | Primárne a sekundárne protilátky sa používajú na nepriamu ELISA. |
| Prepojenie s enzýmami | |
| Primárne protilátky sú spojené s enzýmami. | Sekundárne protilátky sú spojené s enzýmami. |
| Krížová reaktivita druhých protilátok | |
| Priama ELISA eliminuje skríženú reaktivitu druhých protilátok. | Nepriama ELISA je ovplyvnená skríženou reaktivitou druhých protilátok. |
| Signály | |
| Signály sú slabé v porovnaní s nepriamym testom ELISA. | Signály sa zosilňujú v nepriamom teste ELISA. Preto je ľahké ho odhaliť. |
Súhrn – priama verzus nepriama ELISA
ELISA je biochemická technika používaná najmä v imunológii na zistenie prítomnosti protilátky alebo antigénu vo vzorke krvi pacienta. Môže sa uskutočniť prostredníctvom dvoch procesov známych ako priama alebo nepriama ELISA. Priamy test ELISA používa na detekciu antigénu iba primárne protilátky, zatiaľ čo nepriamy test ELISA používa primárne aj sekundárne protilátky. Pri priamom teste ELISA sú primárne protilátky značené, zatiaľ čo v nepriamom teste ELISA sú značené sekundárne protilátky. Toto je rozdiel medzi priamou a nepriamou ELISA.
