Kľúčový rozdiel medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou je v tom, že priama imunofluorescencia využíva jedinú protilátku, ktorá pôsobí proti požadovanému cieľu, zatiaľ čo nepriama imunofluorescencia používa dve protilátky na označenie požadovaného cieľa.
Imunofluorescencia alebo zobrazovanie buniek je technika, ktorá sa používa na označenie špecifického cieľového antigénu fluorofórom. Fluorofór je tu fluorescenčná chemická zlúčenina, ktorá môže po excitácii svetlom opätovne vyžarovať svetlo. Keď sa fluorofór naviaže na cieľový antigén, umožní to detekciu cieľovej molekuly vo vzorke. Aby sme to ďalej opísali, keď sa antigén viaže so špecifickou protilátkou, môže byť konjugovaný s fluorofórmi. Preto je ľahké zistiť prítomnosť cieľového antigénu vo vzorke pri pozorovaní pod fluorescenčným mikroskopom.
Okrem toho existujú dva typy imunofluorescencie; priama a nepriama imunofluorescencia. Rozdiel medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou spočíva najmä v počte použitých protilátok a konjugácii s fluoroforom. To znamená, že pri priamej imunofluorescencii sa fluorofór priamo konjuguje s primárnou protilátkou, zatiaľ čo pri nepriamej imunofluorescencii sa fluorofór konjuguje so sekundárnou protilátkou.
Čo je priama imunofluorescencia?
Imunofluorescencia využíva protilátky na detekciu špecifických cieľových antigénov. Priama imunofluorescencia je jedným z dvoch typov imunofluorescencie. Pri priamej imunofluorescencii sa zúčastňuje jedna protilátka (primárna protilátka) a fluorofór sa priamo konjuguje s primárnou protilátkou. Po naviazaní protilátky na cieľový antigén vyžaruje fluorofór fluorescenciu, ktorú je možné detegovať fluorescenčným mikroskopom.
Obrázok 01: Priama imunofluorescencia
Priama imunofluorescencia je však nákladná metóda, pretože primárne konjugované protilátky sú v porovnaní so sekundárnymi protilátkami nákladné. Napriek tomu nezahŕňa dodatočný krok, teda kratšiu techniku. Okrem toho sú nešpecifické väzby redukované priamou imunofluorescenciou. Krížová reaktivita druhov je teda nízka. Ale pri detekcii je citlivosť priamej imunofluorescencie slabá v porovnaní s nepriamou imunofluorescenciou.
Čo je nepriama imunofluorescencia?
Nepriama imunofluorescencia je druhý typ imunofluorescencie, ktorý zahŕňa dva typy protilátok, ako sú primárne a sekundárne protilátky, pri označovaní cieľového antigénu. Pri tejto metóde sa fluorofór konjuguje so sekundárnou protilátkou. Táto technika teda zahŕňa ďalší krok.
Obrázok 02: Imunofluorescencia
Pri tejto metóde je však citlivosť vysoká, pretože niekoľko fluorofórov možno konjugovať so sekundárnymi protilátkami, čo uľahčuje detekciu. Okrem toho je nepriama imunofluorescencia menej nákladná v dôsledku skutočnosti, že konjugácia sekundárnych protilátok je lacnejšia a jednoduchšia. V porovnaní s priamou imunofluorescenciou je druhová skrížená reaktivita pri nepriamej metóde vysoká.
Aké sú podobnosti medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou?
- Ide o dva typy imunofluorescenčnej techniky.
- Primárne protilátky a fluorofór zahŕňajú obe metódy.
- Reakcia antigén-protilátka prebieha pri oboch metódach.
- Priama aj nepriama imunofluorescencia navyše využíva fluorescenčný mikroskop na detekciu antigénu.
Aký je rozdiel medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou?
Imunofluorescencia môže byť priama alebo nepriama na základe konjugácie fluorofóru s použitými protilátkami. Pri priamej imunofluorescencii sa fluorofór konjuguje s primárnou protilátkou, čo je jediná protilátka, ktorá zahŕňa túto techniku. Na rozdiel od toho sa pri nepriamej imunofluorescencii fluorofór konjuguje so sekundárnou protilátkou, ktorá je jedným z dvoch typov protilátok, ktoré sa podieľajú na technike. Hlavným rozdielom medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou je teda typ protilátky, ktorá sa konjuguje s fluorofórom.
Nasledujúca infografika poskytuje vedľa seba porovnanie rozdielu medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou.
Zhrnutie – Priama verzus nepriama imunofluorescencia
Imunofluorescencia je technika, ktorá sa používa na detekciu prítomnosti špecifických antigénov vo vzorke. Táto technika využíva špecifické protilátky. Preto sa protilátky konjugujú s fluorofórmi, aby ich detegovali pomocou fluorescenčného mikroskopu. Okrem toho existujú dva typy imunofluorescencie, a to priama a nepriama imunofluorescencia. Priama imunofluorescencia zahŕňa jednu protilátku a fluorofór priamo konjugovaný s touto protilátkou. Nepriama imunofluorescencia zahŕňa dve protilátky; primárny a sekundárny a fluorofór konjugovaný so sekundárnou protilátkou. Pretože niekoľko sekundárnych protilátok sa môže viazať na primárnu protilátku a niekoľko fluorofórov sa môže konjugovať so sekundárnymi protilátkami, nepriama imunofluorescencia je citlivejšia metóda ako priama metóda. Okrem toho je nepriama metóda lacnejšia ako priama metóda. Toto je teda rozdiel medzi priamou a nepriamou imunofluorescenciou.
