Kľúčový rozdiel medzi Elisou a Elispot je v tom, že Elisa je enzýmový imunosorbentový test, ktorý určuje celkovú koncentráciu secernovaných signálnych proteínov, zatiaľ čo Elispot je enzýmový imunosorbentný test, ktorý deteguje jednotlivé bunky vylučujúce cytokíny.
Elisa a Elispot sú dva enzýmovo viazané imunosorbentové testy široko používané v medicíne, patológii rastlín, biotechnológiách a rôznych farmaceutických odvetviach. Pri týchto technikách sa proteínový analyt deteguje protilátkou namierenou proti nemu. Elisa je najobľúbenejší enzýmový imunosorbentový test používaný v laboratóriách. Na druhej strane, Elispot je enzýmová imunoanalýza, ktorá sa nepoužíva namiesto Elisy, ale používa sa v laboratóriách ako doplnok k Elisa.
Čo je Elisa Assay?
Elisa je enzýmová imunoanalýza, ktorá určuje celkovú koncentráciu secernovaných signálnych proteínov. Je to široko používaný analytický biochemický test, ktorý prvýkrát opísali Engvall a Perlmann v roku 1971. Táto technika využíva typ enzýmového imunotestu na pevnej fáze na detekciu prítomnosti špecifického proteínu v kvapalnej vzorke pomocou protilátok namierených proti tomuto špecifickému proteínu. Tento test je bežne používaným diagnostickým nástrojom v medicíne, patológii rastlín a biotechnológii.
Mechanizmus testu ELISA
Vo väčšine testov ELISA je na začiatku neznáme množstvo antigénu imobilizované na pevnej podložke (mikrolitrovej platni). Potom sa na pevný povrch nanesie zodpovedajúca primárna protilátka. Táto protilátka tvorí s antigénom komplex (komplex antigén-protilátka). Primárna protilátka naviazaná na antigén môže byť detegovaná sekundárnou protilátkou, ktorá je spojená s enzýmom prostredníctvom biokonjugácie. V poslednom kroku testu Elisa sa pridá látka obsahujúca substrát enzýmu. Ak dôjde k správnej väzbe primárnej protilátky na antigén, substrát spôsobí detegovateľnú zmenu farby. Nakoniec to kvantifikuje antigén vo vzorke.
Obrázok 01: Rôzne typy Elisa
Okrem toho existujú rôzne prístupy k Elise, napríklad priama Elisa a nepriama Elisa. V súčasnosti sa na detekciu ľudských patogénov ako Mycobacterium tuberculosis, rotavírus, vírus hepatitídy B, vírus hepatitídy C, enterotoxín produkujúce E.coli, HIV a SARS-CoV-2 používajú rôzne testy Elisa.
Čo je Elispot Assay?
Elispot je enzýmová imunoanalýza, ktorá deteguje jednotlivé bunky vylučujúce cytokíny. Cecil Czerkinsky prvýkrát opísal ELISpot v roku 1983. Je to typ testu, ktorý sa zameriava na kvantitatívne meranie frekvencie sekrécie cytokínov pre jednu bunku. Je tiež klasifikovaná ako technika, ktorá používa protilátky na detekciu biologického alebo chemického proteínového analytu. Fluorospot test je variáciou testu Elispot, ktorý využíva fluorescenciu na analýzu viacerých analytov (viac tajných proteínov).
Mechanizmus testu Elispot
V tomto mechanizme sa najprv do jamiek mikrolitrových platní pridajú monoklonálne protilátky špecifické pre cytokíny. Potom sa do jamiek pridajú požadované pozorované bunky. Neskôr sa bunky inkubujú. Počas bunkovej inkubácie sa bunky nechajú reagovať na akékoľvek stimuly a vylučovať cytokín. Cytokíny, ktoré boli vylučované inkubovanými bunkami, sa naviažu na protilátky, pretože bunky sú obklopené monoklonálnymi protilátkami špecifickými pre cytokíny.
Obrázok 02: Elispot Assay
Na detekciu týchto cytokínovo špecifických monoklonálnych protilátok sa do jamky pridajú biotinylované špecifické detekčné protilátky. Biotinylované špecifické detekčné protilátky zachytávajú cytokínovo špecifické monoklonálne protilátky v jamkách. Okrem toho sa do jamiek pridajú konjugáty streptavidín-enzým, aby sa naviazali na detekčné protilátky. V poslednom kroku sa do jamiek pridajú špecifické substráty. Reakcie enzýmových konjugátov a substrátov vytvárajú v jamkách zreteľné škvrny. Tieto odlišné body sa čítajú na automatickej čítačke ELISpot. Nakoniec to ďalej vypočíta frekvenciu sekrécie cytokínov.
Aké sú podobnosti medzi Elisou a Elispotom?
- Obe sú to enzýmové imunosorbentné testy.
- Oba testy detegujú špecifické proteínové analyty.
- Tieto testy používajú špecifické protilátky na identifikáciu proteínových analytov.
- Oba testy využívajú enzýmy a substráty.
- Používajú sa ako diagnostický nástroj v lekárskych laboratóriách.
Aký je rozdiel medzi Elisou a Elispotom?
Elisa je enzýmová imunoanalýza, ktorá určuje celkovú koncentráciu secernovaných signálnych proteínov. Na druhej strane, Elispot je enzýmový imunosorbentový test, ktorý meria jednotlivé bunky vylučujúce cytokíny. Toto je kľúčový rozdiel medzi Elisou a Elispotom. Navyše v teste Elisa sa antigén najskôr imobilizuje na mikrolitrových jamkách. Na rozdiel od toho v teste Elispot sa protilátka najskôr imobilizuje na mikrolitrových jamkách. Toto je ďalší rozdiel medzi Elisou a Elispot.
Nižšie uvedená infografika predstavuje podrobnú analýzu rozdielu medzi Elisou a Elispotom vo forme tabuľky.
Zhrnutie – Elisa vs Elispot
Elisa a Elispot sú dva enzýmovo viazané imunosorbentové testy široko používané v medicíne, patológii rastlín, biotechnológiách a rôznych farmaceutických odvetviach. Elisa zisťuje prítomnosť ligandu (proteínu) v kvapalnej vzorke pomocou protilátok namierených proti ligandu, ktorý sa má merať. Elispot test je široko používaná metóda na monitorovanie imunitných reakcií. Pomocou protilátok deteguje jednotlivé bunky vylučujúce cytokíny. Je to technika imunotestu aj biotestu. Toto je zhrnutie rozdielu medzi Elisou a Elispot.
