Transformácia vs. Transfekcia
Transformácia a transfekcia sú dve jednoduché techniky používané na zavedenie cudzieho génu do hostiteľskej bunky. Tieto techniky však závisia od typu hostiteľských alebo vektorových systémov.
Čo je bunková transformácia?
Transformácia je technika používaná na zavedenie génov do buniek kvasiniek a baktérií. Táto technika zvyčajne spôsobuje dedičné zmeny v génoch, a preto je expresia génu trvalá. Bakteriálnu transformáciu prvýkrát predstavil v roku 1928 Frederick Griffith. Potom začiatkom sedemdesiatych rokov minulého storočia bola táto technika použitá v E.coli. Počas procesu transformácie E. coli sú bunky namočené v ľadovo studenom roztoku CaCl2 Tento krok robí bunky E. coli kompetentnými. Potom sa kompetentné bunky zmiešajú s plazmidom DNA a inkubujú sa na ľade počas 20-30 minút. Potom nasleduje krátky tepelný šok, aby sa umožnil prenos DNA do bunky. Nakoniec sa bunky umiestnia do živnej pôdy a inkubujú sa pri 37 °C počas 60-90 minút, aby sa vytvorili plazmidy. Po úspešnom dokončení týchto krokov sa transformované bunky môžu umiestniť na vhodné médium na rozmnožovanie buniek. Keďže sa transformácia považuje za neefektívnu techniku, nemožno ju použiť na prípravu bánk klonov.
Čo je bunková transfekcia?
Transfekcia je metóda zavedenia cudzieho génu zvyčajne do buniek cicavcov. Existujú dva spôsoby transfekcie; menovite prechodná transfekcia a stabilná transfekcia. Pri prechodnej transfekcii je génová expresia dostupná na obmedzený čas; teda zmena génu spôsobuje dočasnú expresiu. Táto metóda transfekcie je jednoduchá a rýchla; preto sa môže používať bežne. Jednou nevýhodou prechodnej transfekcie je obtiažnosť aplikácie pre rozsiahle systémy na syntézu proteínov.
Počas stabilnej transfekcie je cieľový gén integrovaný do genómu hostiteľskej bunky, a preto je génová expresia na rozdiel od prechodnej transfekcie trvalá.
Aký je rozdiel medzi transformáciou a transfekciou?
• Transformácia je vloženie génu do prokaryotickej bunky (bakteriálnej a kvasinkovej), zatiaľ čo transfekcia sa zvyčajne nazýva vloženie génu do bunky cicavca.
• Transformácia vedie k dedičnej zmene v génoch, zatiaľ čo transfekcia môže viesť buď k dočasnej expresii, alebo k trvalým zmenám v génoch.
