Kľúčový rozdiel medzi celkovým počtom buniek a počtom životaschopných buniek je ten, že celkový počet buniek odhaduje všetky bunky vrátane živých aj mŕtvych mikrobiálnych buniek vo vzorke, zatiaľ čo počet životaschopných buniek odhaduje iba živé mikrobiálne bunky vo vzorke.
Počítanie počtu organizmov v populácii sa považuje za nevyhnutné pre väčšinu experimentálnych prác. Preto sa snažíme analyzovať počet mikróbov vo vzorke pomocou priamych a nepriamych metód. Priame merania zahŕňajú metódy, ktoré priamo počítajú počty buniek. Nepriame merania zahŕňajú meranie niektorých parametrov, ktoré môžu súvisieť s počtom buniek, ako je hustota buniek, suchá hmotnosť atď. Niektoré metódy kvantifikujú iba živé mikrobiálne bunky vo vzorke. Jednou z takýchto metód je počítanie životaschopných buniek. Priame mikroskopické počty kvantifikujú všetky bunky v známom objeme média/vzorky pomocou mikroskopu. Preto počíta živé aj mŕtve bunky. Je to typ celkového počtu buniek.
Čo je celkový počet buniek?
Celkový počet buniek je metóda, ktorá zahŕňa počítanie všetkých buniek v známom objeme média/vzorky pomocou mikroskopu a počítacej komôrky (hemocytometra). Na rozdiel od počtu životaschopných buniek sa počítajú živé aj mŕtve bunky. Toto je teda celkový počet, pokiaľ sa počas pozorovania neaplikuje farbenie životaschopnosti. Pri mikroskopii sa bunky pozorujú priamo pod mikroskopom a počítajú sa. Používa bunkovú suspenziu, ktorá pozostáva z mikrobiálnych buniek. Pre jednoduchosť počítania a presné merania je možné vzorku riediť. Pri veľmi vysokých/nízkych koncentráciách buniek je získanie celkového počtu buniek pomocou mikroskopu náročná úloha.
Obrázok 01: Počítacia komora – hemocytometer
Počítacie komôrky sú jednoduché, lacné a rýchle pri zisťovaní celkového počtu buniek. Najdôležitejšie je, že počítacie komory sú užitočné na počítanie eukaryotov aj prokaryotov. Bunky počítame vo vybraných štvorcoch známeho objemu, aby sme kvantifikovali celkový počet buniek.
Čo je počet životaschopných buniek?
Počet životaschopných buniek je metóda počítania živých mikrobiálnych buniek vo vzorke. Počíta iba živé bunky vo vzorke. Počítanie životaschopných doštičiek, membránová filtrácia a najpravdepodobnejší počet je niekoľko techník počítania životaschopných buniek. Tieto prístupy sú založené na raste. Metóda počítania živých mikroorganizmov je výkonná metóda používaná v mnohých mikrobiologických oblastiach vrátane mikrobiológie potravín a mlieka, lekárskej mikrobiológie, mikrobiológie životného prostredia, mikrobiálnej genetiky, vývoja rastových médií a biotechnológie.
Najbežnejší spôsob, ako spočítať životaschopné baktérie, je použiť vzorku schopnú vytvárať kolónie na agarovom médiu. Existujú dva hlavné spôsoby počítania tanierov: technika roztieracej dosky a technika nalievacej dosky. Známy objem vzorky sa môže buď rozotrieť na povrch agarovej platne, alebo vmiešať do agaru. Platňa sa potom inkubuje a spočítajú sa vzniknuté kolónie. Počet kolónií súvisí s počtom mikroorganizmov v pôvodnej vzorke. Životaschopné počty merajú iba tie bunky, ktoré sú živé a rastú.
Obrázok 02: Počet životaschopných platní
Najpravdepodobnejšie číslo (MPN) je alternatívou k metódam počítania doštičiek na odhad hustoty populácie životaschopných buniek. Počíta organizmy rastúce v tekutej kultúre a ide teda o prevažne bakteriologickú techniku. Je obzvlášť užitočný pre nízke koncentrácie organizmov, napr. mlieko, pitná voda.
Technika membránovej filtrácie je vhodnejšia, keď sú mikróby veľmi zriedené, napríklad v mestskom zásobovaní vodou. Robí sa to jednoducho tak, že známy objem kvapaliny prejde cez filter a inkubuje sa na živnom médiu. Spočítajú sa kolónie, ktoré sa vyvinú na filtri, a vypočíta sa počet baktérií na mililiter vzorky.
Aké sú podobnosti medzi celkovým počtom buniek a počtom životaschopných buniek?
- Celkový počet buniek a počet životaschopných buniek sú dva typy mikrobiálnych techník, ktoré kvantifikujú bunky.
- Sú bežne používané techniky počítania v mikrobiologických laboratóriách.
Aký je rozdiel medzi celkovým počtom buniek a počtom životaschopných buniek?
Celkový počet buniek uvádza všetky živé a mŕtve mikrobiálne bunky vo vzorke. Na rozdiel od toho, počet životaschopných buniek obsahuje iba živé bunky vo vzorke. Toto je kľúčový rozdiel medzi celkovým počtom buniek a počtom životaschopných buniek. Celkový počet buniek je nezávislý od rastu kolónií na agarových platniach, zatiaľ čo počet životaschopných buniek je technika založená na raste a závisí od rastu mikrobiálnych kolónií na agarových platniach.
Informačná grafika uvedená nižšie sumarizuje rozdiel medzi celkovým počtom buniek a počtom životaschopných buniek.
Súhrn – Celkový počet buniek vs počet životaschopných buniek
Celkový počet buniek zahŕňa živé aj mŕtve mikrobiálne bunky, zatiaľ čo počet životaschopných buniek obsahuje iba živé bunky. Toto je kľúčový rozdiel medzi celkovým počtom buniek a počtom životaschopných buniek. Tiež počet životaschopných buniek je technika založená na raste, na rozdiel od celkového počtu buniek. Okrem toho vyžaduje inkubáciu platní, kým sa nezískajú viditeľné kolónie. Počet životaschopných doštičiek, MPN a membránová filtrácia sú niekoľko techník počítania životaschopných buniek, zatiaľ čo priama mikroskopia a použitie hemocytometra sú dve techniky celkového počtu buniek.
