Kľúčový rozdiel medzi diferenciálnou a hustotnou gradientovou centrifugáciou je v tom, že diferenciálna centrifugácia oddeľuje častice v zmesi na základe veľkosti častíc, zatiaľ čo centrifugácia s hustotným gradientom oddeľuje častice v zmesi na základe hustoty častíc.
Centrifugácia je metóda separácie rôznych zložiek v zmesi analytu. Táto metóda zahŕňa rotáciu vzorky okolo pevnej osi, čo spôsobuje vznik odstredivej sily. Odstredivá sila spôsobuje, že častice vo vzorke sa pohybujú dole cez kvapalné médium. Tento proces spôsobuje sedimentáciu častíc alebo buniek s rôznymi veľkosťami a hustotami rôznymi rýchlosťami.
Čo je diferenciálna centrifugácia?
Diferenciálna centrifugácia je analytická technika, pri ktorej môžeme separovať častice v zmesi v závislosti od veľkosti častice. Je to najjednoduchšia forma odstreďovania a nazýva sa aj diferenciálne peletovanie. Táto metóda je dôležitá pri oddeľovaní komponentov v bunke. Častice s rôznou veľkosťou podliehajú sedimentácii pri rôznych rýchlostiach odstreďovania. Inými slovami, veľké častice sedimentujú rýchlejšie ako menšie častice. Okrem toho možno rýchlosť sedimentácie zvýšiť zvýšením odstredivej sily.
Pri zvažovaní jej aplikácií je diferenciálna centrifugácia užitočná pri zbere buniek alebo produkcii surových subcelulárnych frakcií z tkanivového homogenátu.napr. pečeňový homogenát obsahuje jadrá, mitochondrie, lyzozómy a membránové vezikuly. Ak tento homogenát odstredíme pri nízkej rýchlosti a na krátky čas, môžeme získať veľké zárodky ako peletu. Ak použijeme vysokú odstredivú silu, potom môžeme dostať mitochondrie do pelety. Biologické vzorky sú však vždy náchylné na kontamináciu.
Čo je centrifugácia s gradientom hustoty?
Odstreďovanie s gradientom hustoty je analytická technika, pri ktorej môžeme separovať častice v zmesi analytu na základe hustoty častice. Pri tejto metóde sa látky koncentrujú v roztoku céznych solí alebo v sacharóze. Spôsob zahŕňa frakcionáciu častíc na základe hustoty vztlaku. Gradient hustoty v tejto metóde je médium cézia alebo sacharóza. Existujú dva typy centrifugácie s hustotným gradientom: rýchlostná zonla centrifugácia a izopyknická centrifugácia.
Rýchlostno-zónová centrifugácia zahŕňa separačné médium, ktoré má vrstvenú štruktúru s úzkou zónou na vrchole hustotného gradientu. V tomto procese majú častice tendenciu pohybovať sa rôznymi rýchlosťami pod odstredivou silou v závislosti od hustoty častíc. Zvyčajne všetky častice produkujú pelety, pretože hustota častíc je vyššia ako gradient hustoty.
Izopyknická centrifugácia je druhý typ metódy centrifugácie s hustotným gradientom. Začína sa homogénnym roztokom. Pod odstredivou silou sa častice v zmesi analytu pohybujú, kým hustota častíc nie je podobná hustotnému gradientu. Preto môžeme túto techniku nazvať aj rovnovážnou centrifugáciou.
Aký je rozdiel medzi diferenciálnou a hustotnou gradientovou centrifugáciou?
Diferenciálna a hustotná gradientová centrifugácia sú dva typy centrifugačných procesov, ktoré sa podieľajú na separácii zložiek v zmesi analytu. Kľúčový rozdiel medzi diferenciálnou a hustotnou gradientovou centrifugáciou je v tom, že diferenciálna centrifugácia oddeľuje častice v zmesi na základe veľkosti častíc, zatiaľ čo centrifugácia s hustotným gradientom oddeľuje častice v zmesi na základe hustoty častíc.
V infografike nižšie sú uvedené ďalšie rozdiely medzi diferenciálnou a hustotnou gradientovou centrifugáciou.
Zhrnutie – Centrifugácia s rozdielom a gradientom hustoty
Diferenciálna a hustotná gradientová centrifugácia sú dva typy centrifugačných procesov, ktoré sa podieľajú na separácii zložiek v zmesi analytu. Kľúčový rozdiel medzi diferenciálnou a hustotnou gradientovou centrifugáciou je v tom, že diferenciálna centrifugácia oddeľuje častice v zmesi na základe veľkosti častíc, zatiaľ čo centrifugácia s hustotným gradientom oddeľuje častice v zmesi na základe hustoty častíc.
