Kľúčový rozdiel medzi izokratickou a gradientovou elúciou je v tom, že izokratická elúcia sa týka udržiavania konštantnej koncentrácie v mobilnej fáze, zatiaľ čo gradientová elúcia sa týka udržiavania meniacej sa koncentrácie v mobilnej fáze.
Pojmy izokratická a gradientová elúcia sa používajú v chromatografii. Pri chromatografickom chode používame stacionárnu fázu, čo je nepohyblivá látka, spolu s mobilnou fázou, pohyblivou látkou. Izokratická a gradientová elúcia popisuje vlastnosti mobilnej fázy.
Čo je izokratická elúcia?
Izokratická elúcia je termín používaný v chromatografii, keď má mobilná fáza konštantnú koncentráciu. Tu je koncentrácia mobilnej fázy konštantná počas celého chromatografického procesu. V tomto procese môžeme na chromatograme pozorovať lineárne zväčšovanie šírky píku s retenčným časom. To však vedie k nevýhode – neskoro eluujúce píky pre neskorú elúciu sú veľmi ploché a široké. Preto je ťažké rozpoznať tieto široké vrcholy ako vrcholy.
Pri izokratickej elúcii sa navyše selektivita nemení podľa rozmerov kolóny. To znamená, že selektivita nezávisí od zmien rozmerov stĺpcov. Tu sa dĺžka a priemer považujú za rozmery stĺpca. Preto sa píky eluujú v rovnakom poradí.
Čo je gradientová elúcia?
Gradientová elúcia je termín používaný v chromatografii, keď tu má mobilná fáza rôznu koncentráciu. Inými slovami, koncentrácia mobilnej fázy nemusí zostať konštantná. Napríklad pri HPLC používa bežná separačná metóda spočiatku 10% metanol a končí pri 90% postupným zvyšovaním koncentrácie. Mobilná fáza má dve zložky: slabé rozpúšťadlo a silné rozpúšťadlo. Slabé rozpúšťadlo umožňuje pomalú elúciu rozpustenej látky, zatiaľ čo silné rozpúšťadlo spôsobuje rýchlu elúciu rozpustenej látky. V chromatografii na reverznej fáze používame vodu ako slabé rozpúšťadlo a organické rozpúšťadlo ako silné rozpúšťadlo.
Obrázok 01: HPLC
Metóda gradientovej elúcie navyše znižuje neskoršie eluované zložky, aby sa rýchlejšie eluovali, čím sa v chromatograme získa úzky pík. Táto metóda zlepšuje tvar píku a tiež výšku píku. Okrem toho pri technike gradientovej elúcie sa poradie elúcie mení so zmenami rozmerov kolóny.
Aký je rozdiel medzi izokratickou a gradientovou elúciou?
Pojmy izokratická a gradientová elúcia sa používajú v chromatografii. Izokratická a gradientová elúcia popisujú vlastnosti mobilnej fázy. Kľúčový rozdiel medzi izokratickou a gradientovou elúciou je v tom, že izokratická elúcia sa týka udržiavania konštantnej koncentrácie v mobilnej fáze, zatiaľ čo gradientová elúcia sa týka udržiavania premenlivej koncentrácie v mobilnej fáze.
Pri izokratickej elučnej technike sa šírka píku zvyšuje s retenčným časom lineárne. Avšak v technike gradientovej elúcie je retencia neskôr eluovaných zložiek znížená, takže elúcia je rýchlejšia a poskytuje úzke píky. Okrem toho pri izokratickej elúcii selektivita nezávisí od rozmerov kolóny, ale pri gradientovej elúcii sa selektivita mení s meniacimi sa rozmermi kolóny.
Nasledujúca tabuľka sumarizuje rozdiel medzi izokratickou a gradientovou elúciou.
Súhrn – izokratická verzus gradientová elúcia
Izokratická elúcia a gradientová elúcia popisujú vlastnosti mobilnej fázy. Kľúčový rozdiel medzi izokratickou a gradientovou elúciou je v tom, že izokratická elúcia sa týka udržiavania konštantnej koncentrácie v mobilnej fáze, zatiaľ čo gradientová elúcia sa týka udržiavania premenlivej koncentrácie v mobilnej fáze.
