Kľúčový rozdiel – HPLC vs LCMS
Pozrime sa najprv na význam HPLC a LCMS a až potom analyzujeme rozdiel medzi HPLC a LCMS. Chromatografia je separačná technika v chemickej analýze, pri ktorej sa zložky vzorky separujú počas prechodu cez chromatografické médium. Zahŕňa tiež interakciu so vzorkou, stacionárnou fázou a mobilnou fázou. HPLC znamená High Performance Liquid Chromatography a používa sa ako metóda kvapalinovej chromatografie v analytickej chémii. Kombinácia kvapalinovej chromatografie a hmotnostnej spektroskopie (LCMS) bola vyvinutá pre kvantitatívnu analýzu vybraných biomolekúl a je to vysoko citlivý, presný a špecifický testovací postup v porovnaní s HPLC. Toto je kľúčový rozdiel medzi HPLC a LCMC. Tento článok vám predstaví HPLC a LCMC, ktoré sa zaoberajú chemickou analýzou a diskutuje o rozdieloch medzi HPLC a LCMS.
Čo je HPLC?
Vysokoúčinná kvapalinová chromatografia (HPLC) je populárna separačná technika v analytickej chémii. Používa sa hlavne na oddelenie zložiek, identifikáciu a kvantifikáciu každej zložky v zmesi. Skôr bola táto metóda známa ako vysokotlaková kvapalinová chromatografia, pretože závisela od čerpadiel, aby pretekala stlačené kvapalné rozpúšťadlo obsahujúce zmes vzorky cez kolónu naplnenú pevným adsorbčným materiálom. Každá jedna zložka v zmesi vzorky interaguje s pevným adsorbčným materiálom odlišne, čo vedie k rôznym prietokom pre rôzne zložky. To môže viesť k oddeleniu zložiek, keď vytekajú z HPLC kolóny.
HPLC sa používa na rôzne aplikácie, ako je analýza hladín vitamínu D v krvi, užívanie nelegálnych drog športovcami prostredníctvom zisťovania zvyškov drog v moči, triedenie zložiek komplexnej biologickej vzorky na výskumné účely a analýzy a výrobu liečiv.
Čo je LCMS?
Kvapalinová chromatografia – hmotnostná spektrometria (LCMS) je analytická technika, ktorá kombinuje fyzikálne separačné schopnosti kvapalinovej chromatografie so schopnosťami hmotnostnej analýzy hmotnostnej spektrometrie (MS). Kvapalinová chromatografia je separačná technika a hmotnostná spektrometria sa používa na analýzu pomeru hmotnosti k náboju nabitých častíc. Fyzikálna separácia sa zvyčajne dosahuje pomocou HPLC a alternatívne LCMS, tiež známej ako HPLC-MS. LCMS je dominantná analytická technika, ktorá má v porovnaní s HPLC veľmi vysokú presnosť, citlivosť a špecifickosť. Je teda užitočný v mnohých aplikáciách, ako sú výskumné účely, analýza liečiv, analýza potravín atď. LCMS sa používa hlavne na separáciu, detekciu, identifikáciu a kvantifikáciu biochemických vlastností konkrétnej vzorky v prítomnosti zložitých chemických zmesí.
Aký je rozdiel medzi HPLC a LCMC?
Skratka a definícia HPLC a LCMC
HPLC: HPLC znamená High-Performance Liquid Chromatography. Ide o separačnú techniku, ktorá sa používa hlavne na oddelenie zložiek, identifikáciu a kvantifikáciu každej zložky v zmesi.
LCMS: LCMS znamená kvapalinovú chromatografiu a hmotnostnú spektrometriu. Je to analytická technika, ktorá kombinuje fyzikálne separačné schopnosti kvapalinovej chromatografie so schopnosťami hmotnostnej analýzy hmotnostnej spektrometrie (MS).
Charakteristiky HPLC a LCMC
Klasifikácia
HPLC: Toto je len metóda kvapalinovej chromatografie.
LCMS: Toto je kombinácia metódy kvapalinovej chromatografie a metódy hmotnostnej spektrometrie.
Efektívnosť
HPLC: V porovnaní s LCMS je HPLC analýza menej účinná a pomalšia.
LCMS: V porovnaní s HPLC je analýza LCMS efektívna a rýchlejšia.
Citlivosť
HPLC: V porovnaní s LCMS je HPLC analýza menej citlivá.
LCMS: V porovnaní s HPLC je LCMS analýza citlivejšia.
Špecifickosť
HPLC: V porovnaní s LCMS je HPLC analýza menej špecifická.
LCMS: V porovnaní s HPLC je LCMS analýza špecifickejšia.
Presnosť
HPLC: HPLC poskytuje menej presné výsledky ako LCMS na stanovenie niektorých chemikálií.
LCMS: LCMS poskytuje presnejšie výsledky ako HPLC na stanovenie niektorých chemikálií.
Component
HPLC: HPLC možno považovať za súčasť LCMS.
LCMS: LCMS nemožno považovať za súčasť HPLC.
Zdroj iónov
HPLC: Zdroj iónov v prístroji HPLC neexistuje.
LCMS: Iónový zdroj je prítomný v prístroji LCMS.
Aplikácie
HPLC: Ióny, polyméry, organické molekuly a biomolekuly možno analyzovať pomocou HPLC.
LCMS: Organické molekuly a biomolekuly možno analyzovať. Na rozdiel od HPLC možno LCMS použiť na preskúmanie neúplne rozlíšených zmesí.
Prevádzka
HPLC: Schéma prístroja HPLC je uvedená na obrázku 1 a zvyčajne obsahuje automatický vzorkovač, čerpadlá a detektor. Vzorkovač zavedie zmes vzorky do mobilnej fázy (stlačená zmes rozpúšťadiel, ako je voda, acetonitril a/alebo metanol), ktorá ju prenesie do kolóny. Čerpadlá dodávajú požadovaný prietok a zloženie mobilnej fázy cez kolónu. Kolóna je naplnená adsorbentom, ktorým sú zrnité pevné častice, ako je oxid kremičitý alebo polyméry. Detektor vytvára signál úmerný množstvu prítomnej zložky vzorky v kolóne, čím umožňuje kvantifikovateľnú analýzu vybraných zložiek vzorky. Prístroj HPLC je riadený a analýzu dát zabezpečuje digitálny mikroprocesor a užívateľský softvér.
Obrázok 1: Schéma prístroja HPLC
LCMS: Schéma prístroja LCMS je uvedená na obrázku 2. Extrakt vzorky sa vloží do kolóny pozostávajúcej z HPLC. Tento stĺpec uchováva vzorky metabolitov na základe fyzikálnych charakteristík a rôzne metabolity prúdia do hmotnostného spektrometra v rôznych časových intervaloch. Hmotnostná spektroskopia sa používa na hodnotenie hmotnosti častíc, na určenie usporiadania prvkov v molekule a na objasnenie štruktúr molekúl. Vzorka by sa však mala ionizovať, aby sa vytvorili nabité molekuly, aby sa určil ich pomer hmotnosti k náboju. Preto namiesto prístrojov HPLC pozostáva LCMS z ďalších troch modulov, ako je zdroj železa, hmotnostný analyzátor a detektor. Zdroj iónov môže transformovať vzorku plynnej fázy na ióny a hmotnostný analyzátor zoskupuje ióny podľa ich hmotnosti pomocou elektromagnetických polí. Nakoniec detektor kvantifikuje hodnoty a poskytne údaje o každom ióne prítomného vo vzorke. Techniku LCMS je možné použiť pre kvalitatívne aj kvantitatívne aplikácie.
Obrázok 2: Schéma prístroja LCMS
Na záver, HPLC je metóda kvapalinovej chromatografie, zatiaľ čo LCMS je kombináciou kvapalinovej chromatografie a hmotnostnej spektrometrie. Obe tieto analytické techniky majú odlišné charakteristiky, ale možno ich použiť na identifikáciu a kvantifikáciu zloženia potravín, liečiv a iných bioaktívnych molekúl.
