Kľúčový rozdiel – Gélová elektroforéza a SDS Strana
Gélová elektroforéza je technika, ktorá oddeľuje makromolekuly v elektrickom poli. Je to bežná metóda v molekulárnej biológii na oddelenie DNA, RNA a proteínov zo zmesí podľa ich veľkosti molekúl. SDS Page je typ gélovej elektroforézy, ktorá sa používa na oddelenie proteínov z proteínovej zmesi na základe ich veľkosti. Gélová elektroforéza je termín používaný na označenie bežnej techniky používanej na separáciu DNA, RNA a proteínov, zatiaľ čo SDS Page je jeden typ gélovej elektroforézy. Toto je kľúčový rozdiel medzi gélovou elektroforézou a SDS Page.
Čo je gélová elektroforéza?
Gélová elektroforéza je bežná technika používaná v laboratóriách na oddelenie nabitých molekúl, ako sú DNA, RNA, proteíny atď., z ich zmesí. Pri gélovej elektroforéze sa používa gél. Pôsobí ako molekulové sito. V gélovej elektroforéze sa používajú dva typy gélov, a to agaróza a polyakrylamid. Výber gélu a gélového prípravku sú dôležitými faktormi, ktoré je potrebné zvážiť pri gélových elektroforézach, pretože veľkosť pórov gélu by sa mala starostlivo upravovať, aby sa molekuly dobre separovali gélovou elektroforézou. Gélová elektroforéza má elektrické pole spojené s dvoma koncami gélu. Jeden koniec gélu vykazuje kladný náboj, zatiaľ čo druhý koniec je nabitý záporne.
DNA a RNA sú negatívne nabité molekuly. Akonáhle sú vložené do gélu zo záporného konca gélu a aplikované na elektrické pole, migrujú cez gélové póry smerom ku kladne nabitému koncu gélu. Rýchlosť migrácie závisí od náboja a veľkosti molekuly. Menšie molekuly ľahko migrujú cez gélové póry ako väčšie molekuly. Preto menšie molekuly prechádzajú cez gél na veľkú vzdialenosť a väčšie molekuly na krátku vzdialenosť. Na pozorovanie pohybu molekúl na géli sa používajú špeciálne typy farbív. Elektrické pole sa aplikuje na určitú dobu a zastaví sa, aby sa zabránilo strate molekúl a aby sa molekuly udržali v ich pohyblivých polohách. V géli možno pozorovať rôzne pásy. Tieto pásy predstavujú molekuly rôznych veľkostí. Gélová elektroforéza je preto užitočná na rozlíšenie molekúl podľa ich veľkosti.
Gélová elektroforéza je začlenená do rôznych techník ako preparatívna technika v molekulárnej biológii, ako je PCR, RFLP, klonovanie, sekvenovanie DNA, Southern blotting, mapovanie genómu atď.
Obrázok 01: Elektroforéza na agarózovom géli
Čo je stránka SDS?
Polyakrylamidová gélová elektroforéza s dodecylsulfátom sodným (SDS Page) je typ gélovej elektroforézy používanej na separáciu proteínov. Keď sa na oddelenie proteínov používa gélová elektroforéza, sú potrebné špeciálne ošetrenia, pretože proteíny nie sú negatívne nabité ako DNA a RNA a nemigrujú smerom k pozitívnemu alebo negatívnemu koncu. Preto sú proteíny denaturované a potiahnuté negatívnym nábojom pred gélovou elektroforézou. Vykonáva sa pomocou detergentu nazývaného dodecylsulfát sodný (SDS). Gélová elektroforéza, ktorá využíva SDS a polyakrylamidový gél ako podporné médium, je známa ako SDS Page. Táto technika sa bežne používa v biochémii, genetike, forenznej a molekulárnej biológii.
Počas stránky SDS sa proteíny zmiešajú s SDS. SDS rozkladá proteíny do lineárneho tvaru a poťahuje ich negatívnym nábojom úmerným ich molekulovej hmotnosti. V dôsledku negatívneho náboja migrujú proteínové molekuly smerom ku kladnému nabitému koncu gélu a oddeľujú sa podľa svojej molekulovej hmotnosti. Na stránke SDS sa ako pevný nosič gélu používa polyakrylamid. Skutočná separácia proteínov závisí hlavne od vlastností gélu. Preto by sa príprava polyakrylamidového gélu mala robiť opatrne a mali by sa použiť správne koncentrácie polyakrylamidu. Polyakrylamidové gély vykazujú vysoké rozlíšenie ako agarózové gély. Preto sa SDS Page považuje za techniku s vysokým rozlíšením na separáciu proteínov.
SDS Page je typ denaturačnej gélovej elektroforézy. Má veľké obmedzenie v analýze bielkovín. Keďže SDS pred separáciou denaturuje proteíny, neumožňuje detekciu enzymatickej aktivity, interakcií s väzbou proteínov, proteínových kofaktorov atď.
Obrázok 02: Strana SDS
Aký je rozdiel medzi gélovou elektroforézou a stránkou SDS?
Gélová elektroforéza vs stránka SDS |
|
| Gélová elektroforéza je metóda vykonávaná na oddelenie makromolekúl pomocou elektrického poľa. | SDS Page je technika gélovej elektroforézy s vysokým rozlíšením, ktorá sa používa na oddelenie proteínov na základe ich hmotnosti. |
| Gel Run | |
| Môže sa vykonávať horizontálne alebo vertikálne. | Stránka SDS beží vždy vertikálne. |
| Základ pre oddelenie | |
| Oddeľovanie prebieha podľa nabitia a veľkosti. | Oddeľovanie bielkovín prebieha podľa hmotnosti a náboja. |
| Rozlíšenie | |
| Agarózová gélová elektroforéza má nízke rozlíšenie a polyakrylamidová gélová elektroforéza má vyššie rozlíšenie | Stránka SDS má lepšie rozlíšenie. |
| Denaturácia | |
| Gélová elektroforéza zahŕňa denaturačné aj nedenaturačné techniky. | SDS Page denaturuje proteíny pred separáciou. |
Zhrnutie – Gélová elektroforéza vs SDS Strana
Gélová elektroforéza je bežná technika používaná na separáciu a analýzu DNA, RNA a proteínov na základe ich veľkosti a náboja. Existujú dva hlavné typy gélovej elektroforézy, a to elektroforéza na agarózovom géli a elektroforéza na polyakrylamidovom géli. Agarózové gély sa používajú hlavne na separáciu nukleových kyselín; ak je potrebné vyššie rozlíšenie, používajú sa polyakrylamidové gély. SDS Page je typ gélovej elektroforézy bežne používaný na separáciu komplexných zmesí proteínov. Považuje sa za techniku separácie proteínov s vysokým rozlíšením. Toto je rozdiel medzi gélovou elektroforézou a stránkou SDS.
