Kľúčový rozdiel medzi mikronukleovým a kométovým testom je ten, že mikronukleový test je dôležitý na kontrolu poškodenia chromozómov v dôsledku expozície mutagénu, zatiaľ čo kométový test je dôležitý na detekciu primárneho poškodenia DNA v jednotlivých bunkách.
Testy genotoxicity pomáhajú posúdiť možnosti mutácií a chromozomálnych abnormalít. Genotoxíny zahŕňajú chemické látky a žiarenie. Karcinogény, mutagény a teratogény sú hlavné kategórie genotoxínov. Spôsobujú rôzne poškodenia, ako sú bodové mutácie, delécie, jedno a dvojvláknové zlomy, chromozomálne aberácie, mikrojadrá, opravy DNA a interakcie bunkového cyklu. Takéto stavy môžu viesť k širokému spektru chorôb a testy genotoxicity zabraňujú potenciálnemu poškodeniu týmito stavmi. Mikronukleový test a kométový test sú dve techniky v rámci testov genotoxicity.
Čo je mikronukleový test?
Micronucleus assay je test na hodnotenie poškodenia chromozómov v dôsledku expozície mutagénu. Je dôležitý pri skríningu chemikálií, ktoré spôsobujú tvorbu vretienka a mikrojadier. Mikronukleový test poskytuje informácie o stabilite chemikálií pri interferencii so štruktúrou a funkciou chromozómov. Mnohé karcinogény sú pozitívne v mikronukleárnych testoch. Proces testu zahŕňa chemické ošetrenie a meranie frekvencie mikronukleárnych buniek. Ak dôjde k abnormálnemu zvýšeniu počtu buniek mikrojadier, dôjde k záveru, že chemikália vyvoláva poškodenie chromozómov.
Mikronukleový test sa zvyčajne vykonáva na aktívne sa deliacich bunkách. Preto sú erytrocyty a kmeňové bunky kostnej drene produkované bunkovým delením ideálnymi kandidátmi na takéto testy. Zažívajú neustály a rýchly obrat. Keďže erytrocyty nemajú žiadne skutočné jadrá, mikrojadrové bunky sú na konci testu viditeľnejšie.
Obrázok 01: Pozorovanie mikrojadrového testu
Micronucleus testy sú ekonomické, rýchlejšie, pohodlné a vyžadujú si menej zručností. Rýchlo a spoľahlivým spôsobom odrážajú chromozomálne aberácie a sú mimoriadne užitočné na rýchle posúdenie chromozomálnych poškodení. Špeciálnym a všestranným typom mikronukleového testu je cytokinéza blokujúci mikronukleový cytom (CBMNcyt). Je to preferovaný test na meranie chromozomálneho poškodenia a nestability v bunkách. Hlavným problémom použitia mikronukleového testu je však to, že nedokáže určiť rôzne typy chromozomálnych aberácií a test má vplyv na mitotickú rýchlosť a podiel bunkovej smrti, čo spôsobuje zmenu výsledkov.
Čo je to Comet Assay?
Skúška Comet, ktorá je známa aj ako skúška jednogélovej elektroforézy, je jednoduchá a citlivá technika na detekciu poškodenia DNA. Meria zlomy DNA v eukaryotických bunkách a je štandardnou technikou na biomonitoring a testovanie genotoxicity.
Kométový test sa podieľa na enkapsulácii buniek v suspenziách agarózy s nízkou teplotou topenia, lýze buniek v neutrálnych alebo alkalických podmienkach a elektroforéze suspendovaných lyzovaných buniek. Počas procesu enkapsulácie sú bunky suspendované v roztavenej agaróze s nízkou teplotou topenia a agaróza vytvára matricu sacharidových vlákien, aby ich ukotvila na mieste. Agaróza je osmoticky neutrálna; preto umožňuje roztokom preniknúť cez gél a pôsobiť na bunky bez toho, aby ich narušili a posunuli. Lýzovací roztok je vysoko koncentrovaný vodný soľný roztok a detergent. Táto soľ narúša proteíny a väzbové vzorce v bunke, pričom narúša obsah RNA v bunke. Bunky ničia a všetky proteíny, RNA, cytoplazmatické a nukleoplazmatické zložky sa rozrušia a difundujú do agarózovej matrice, pričom zanechajú DNA.
Obrázok 02: Comet Assay
Roztok na elektroforézu je alkalický roztok, kde dvojzávitnica DNA denaturuje a nukleoid sa stáva jednovláknovým. Počas tohto procesu sa na analýzu obrázkov aplikuje elektrické pole. Analýza obrazu meria celkovú intenzitu fluorescencie pre DNA a nukleoid a porovnáva ich. Celková štruktúra pripomína kométu s kruhovou hlavou zodpovedajúcou zvyšnej nepoškodenej DNA a chvostom pre poškodenú DNA. Čím jasnejší a dlhší je chvost vďaka silnejším signálom, tým vyššia je úroveň poškodenia.
Aké sú podobnosti medzi mikronukleovým a kométovým testom?
- Micronucleus a kométový test sú ekonomické, rýchlejšie, pohodlné a vyžadujú si menej zručností.
- Vykonávajú sa hlavne na DNA.
- Oba testy pomáhajú pri hodnotení mutácií a chromozomálnych abnormalít.
- Okrem toho obe techniky používajú na vykonanie postupu chemikálie.
Aký je rozdiel medzi mikronukleovým a kométovým testom?
Mikronukleový test je dôležitý pri kontrole poškodenia chromozómov v dôsledku expozície mutagénom, zatiaľ čo kométový test je dôležitý pri zisťovaní primárneho poškodenia DNA v jednotlivých bunkách. Toto je kľúčový rozdiel medzi mikronukleovým a kométovým testom. Mikronukleový test je tiež dobre zavedený na detekciu klastogenicity a aneugenity. Kométový test sa používa ako test genotoxicity na detekciu primárneho poškodenia DNA v bunkách. Okrem toho mikronukleový test poskytuje informácie o stabilite chemikálií, zatiaľ čo kométový test je jednobunková gélová elektroforéza.
Nižšie uvedená infografika predstavuje rozdiely medzi mikronukleovým a kométovým testom v tabuľkovej forme na porovnanie vedľa seba.
Súhrn – Micronucleus vs Comet Assay
Testy genotoxicity pomáhajú posúdiť možnosti mutácií a chromozomálnych abnormalít. Mikronukleový test a kométový test sú dve techniky v rámci testov genotoxicity. Mikronukleový test hodnotí poškodenie chromozómov ako dôsledok expozície mutagénu. Kométový test je jednoduchá a citlivá technika na detekciu poškodenia DNA. Toto je kľúčový rozdiel medzi mikronukleovým a kométovým testom. Mikronukleový test je dôležitý pri skríningu chemikálií, ktoré spôsobujú tvorbu vretienka a mikrojadier. Kométový test sa podieľa na enkapsulácii buniek v agarózových suspenziách s nízkou teplotou topenia, lýze buniek v neutrálnych alebo alkalických podmienkach a elektroforéze suspendovaných lyzovaných buniek.
