Kľúčový rozdiel – Transformanty vs Rekombinanty
Rekombinácia a transformácia sú dva kľúčové kroky v genetickom inžinierstve, kde sú vlastnosti organizmu zámerne modifikované manipuláciou s jeho genetickým materiálom. Rekombinácia je proces, pri ktorom sa cudzia DNA začlení do vektorového genómu a vytvorí sa rekombinantná molekula DNA. Transformácia je ďalším krokom, v ktorom rekombinantná molekula vstupuje do hostiteľského organizmu. Hostiteľská bunka alebo organizmus uľahčuje expresiu rekombinantnej molekuly. Kľúčový rozdiel medzi transformantmi a rekombinantmi je v tom, že transformanty sú bunky alebo organizmy, ktoré prijímajú rekombinantnú molekulu dovnútra a uľahčujú expresiu, zatiaľ čo rekombinanty sú vektory, ktoré umožňujú vloženie cudzej DNA do jej genómu a transport do hostiteľských transformantov na expresiu.
Čo sú transformanti?
Transformanty sú bunky alebo organizmy, v ktorých sa rekombinantná DNA prijíma na expresiu. Baktérie sa bežne používajú ako hostiteľské organizmy v genetickom inžinierstve, pretože sa ľahko pestujú, množia a manipuluje sa s nimi v laboratórnych podmienkach a proces transformácie je v porovnaní s inými organizmami jednoduchý. Najpopulárnejšou hostiteľskou baktériou používanou v genetickom inžinierstve je baktéria E coli.
Počas procesu transformácie sú hostiteľské bunky prinútené prijať rekombinanty. Niektoré hostiteľské bunky však neprijímajú rekombinantné molekuly. Sú známe ako netransformanty a bunky, ktoré vo vnútri obsahujú molekuly rekombinantnej DNA, sú známe ako transformanty. Selekcia transformantov z netransformantov sa uskutočňuje pomocou selekčných markerov v molekulárnej biológii. Selekčné markery sú vložené do vektorového genómu spolu s DNA inzertom. Bežne používané selektovateľné markery sú gény rezistentné na antibiotiká. Markerové gény uľahčujú diferenciáciu transformantov a pokračujú v procese. Po procese transformácie sa baktéria pestuje v médiu obsahujúcom antibiotikum. Iba transformanty sú schopné rásť na tomto médiu, pretože obsahujú rekombinanty vo vnútri.
Akonáhle je molekula rekombinantnej DNA transformovaná vo vnútri hostiteľského organizmu, cudzorodá DNA môže byť buď integrovaná do genómu hostiteľskej bunky, alebo môže zostať neintegrovaná v cytoplazme. K expresii a replikácii cudzej DNA však dochádza v hostiteľskom organizme a prináša požadovaný výsledok procesu.
Čo sú rekombinanty?
Rekombinant je organizmus alebo bunka, ktorá má rekombinovaný genóm obsahujúci cudziu DNA. Rekombinanty sú výsledkom procesu genetického inžinierstva. Sú umelo skonštruované in vitro vložením požadovaných génov a modifikáciou genómu. Bakteriálne plazmidy a bakteriofágy často pôsobia ako rekombinanty v genetickom inžinierstve. Má chiméru rôznych DNA. Rekombinantná molekula DNA prenáša cudziu DNA do hostiteľského organizmu a umožňuje jej expresiu a tvorbu požadovaného produktu.
Rekombinantné molekuly sú konštruované pomocou reštrikčných endonukleáz a DNA ligáz. Požadovaný fragment DNA sa oddelí od pôvodného organizmu a vloží sa do vektora, aby sa vytvoril rekombinant na transformáciu. Rezanie požadovaného génu a otvorenie organizmu vektora by sa malo uskutočniť pomocou rovnakého reštrikčného enzýmu, aby sa vytvorili kompatibilné lepkavé konce, ktoré sa spoja dohromady. Akonáhle je cudzia DNA začlenená do vektorového genómu, je známa ako rekombinantná alebo rekombinantná molekula DNA.
Obrázok 02: Rekombinantná DNA
Aký je rozdiel medzi transformantmi a rekombinantmi?
Transformanty vs Rekombinanty |
|
| Transformanty sú bunky, ktoré majú vo vnútri molekulu rekombinantnej DNA. | Rekombinanty sú nosné molekuly, ktoré majú cudzorodú DNA vloženú do vlastného genómu. |
| Expresia cudzej DNA | |
| Sú to hostiteľské bunky, ktoré sú schopné exprimovať rekombinantnú DNA. | Mali by byť schopné sa replikovať v rámci hostiteľského organizmu. |
| Selection | |
| Ako hostiteľské bunky sa vyberajú bunky, ktoré sa dajú ľahko pestovať a množiť. | Musia byť ľahko extrahovateľné a mali by obsahovať voliteľné značky. |
Zhrnutie – Transformanty vs Rekombinanty
Transformanty sú bunky alebo organizmy s rekombinantnými molekulami DNA vo vnútri. Rekombinanty sú organizmy alebo bunky, ktoré prešli genetickou rekombináciou a majú vo svojich genómoch cudziu DNA. Bakteriálne bunky sa často používajú ako hostiteľské bunky na transformáciu a plazmidy a bakteriofágy sa často používajú ako vektory v technológii rekombinantnej DNA. Toto je rozdiel medzi transformantmi a rekombinantmi.
