Kľúčový rozdiel – CFU vs. MPN
Jednotka tvoriaca kolónie (CFU) a najpravdepodobnejšie číslo (MPN) sú dve metódy používané na stanovenie počtu mikroorganizmov vo vzorkách. Oba parametre sa používajú na zistenie kvality vody a fekálnych indikátorových baktérií vo vzorkách vody. Jednotka tvoriaca kolónie je miera používaná na výpočet počtu životaschopných bakteriálnych buniek alebo buniek húb v špecifickom objeme alebo hmotnosti danej vzorky. Štandardná jednotka pre tento parameter je CFU/ml alebo CFU/g. Najpravdepodobnejšie číslo je ďalšia jednotka používaná na meranie počtu životaschopných bakteriálnych buniek v kvapalnej vzorke. Kľúčový rozdiel medzi CFU a MPN je v tom, že CFU sa vypočítava z kolónií baktérií a húb rastúcich na platni s pevným agarom, zatiaľ čo MPN sa vypočítava z životaschopných baktérií rastúcich v kvapalnom médiu.
Čo je CFU?
Colony forming unit (CFU) je parameter, ktorý meria počet životaschopných bakteriálnych alebo hubových buniek v danej vzorke. Metóda, ktorá počíta jednotky tvoriace kolónie, sa označuje ako štandardné počítanie na platniach. Životaschopné kolónie, ktoré sa objavia na agarových platniach, sú vyjadrené ako CFU na 1 ml (jednotka tvoriaca kolónie na mililiter) vzorky pre kvapaliny alebo CFU na 1 g (jednotka tvoriaca kolónie na jeden gram) vzorky pre tuhé látky.
Na meranie CFU vo vzorke sa používajú dve bežné metódy. Sú to metóda rozprestretej dosky a metóda naliatej dosky. Tieto dve metódy sú podporované technikou nazývanou sériové riedenie. Sériovo riedené vzorky umožňujú získať spočítateľný počet kolónií na povrchu agaru. Známy objem vzorky možno rozotrieť na povrch agarovej platne alebo zmiešať s agarom a naliať na platňu. Platňa sa potom inkubuje a spočítajú sa vzniknuté kolónie. Počet kolónií sa vzťahuje na počet mikroorganizmov v pôvodnej vzorke. Misky, ktoré vykazujú príliš veľa kolónií alebo príliš málo kolónií, sú vylúčené z počítania, pretože výsledky na týchto platniach nemusia byť štatisticky presné. Štatisticky je najlepší rozsah 30 – 300 kolónií na agarovej miske. Preto by sa mali vybrať správne platne pre presný výpočet. Pre vyššie uvedenú funkciu sa vykoná sériové riedenie.
Keď spočítate počet životaschopných kolónií na miskách, CFU/ml možno vypočítať pomocou nasledujúcej rovnice.
CFU na ml pôvodnej vzorky=počet kolónií na platni X faktor riedenia
Faktor riedenia=(1/ riedenie platne)
Ak napríklad dostanete 149 kolónií na platničku s riedením 10-4, počet baktérií v 1 ml pôvodnej vzorky možno vypočítať takto:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 alebo 1490000
=1. 49 x 106
Obrázok 01: Jednotka na tvorbu kolónií
Čo je MPN?
Najpravdepodobnejšie číslo je alternatívne meranie k CFU/ml. MPN tiež odhaduje životaschopné bunky v kvapalnej vzorke. Počíta organizmy rastúce v tekutej kultúre a je to prevažne bakteriologická technika. Táto metóda je obzvlášť užitočná pre vzorky, ktoré obsahujú nízke koncentrácie bakteriálnych buniek; napríklad mlieko, pitná voda atď. Hodnota MPN je vyjadrená pre 100 ml objemu. MPN sa opiera o štatistickú metódu založenú na teórii pravdepodobnosti. Existujú štatistické tabuľky určené na zistenie hodnôt MPN na 100 ml vzorky. Tieto tabuľky zobrazujú výsledky pri 95 % hraniciach spoľahlivosti.
Hodnota MPN sa vypočíta po vykonaní techniky nazývanej metóda fermentácie vo viacerých skúmavkách. Tri sady skúmaviek obsahujúcich vhodné kultivačné médium sa naočkujú tromi rôznymi objemami vzorky, ako je 10 ml, 1 ml a 0.1 ml a inkubované pre rast. Po inkubačnej dobe sú skúmavky označené + (pozitívne) alebo – (negatívne) na prítomnosť alebo absenciu rastu. Vzory pozitívnych a negatívnych výsledkov sa potom porovnajú s tabuľkou MPN štatistických pravdepodobností, aby sa odhadol počet mikroorganizmov. Potom je uvedená hodnota MPN pre 100 ml vzorky. MPN sa široko používa na detekciu koliformných baktérií prítomných vo vzorkách vody.
Obrázok 02: Tabuľka MPN
Aký je rozdiel medzi CFU a MPN?
CFU vs. MPN |
|
| CFU je miera používaná na vyjadrenie počtu životaschopných kolónií baktérií alebo húb v danej vzorke. | MPN je alternatívne meranie k CFU a meria počet životaschopných bakteriálnych buniek v tekutej vzorke. |
| Jednotka | |
| CFU/ml alebo CFU/g | MPN/100 ml |
| Výpočet | |
| CFU sa vypočíta spočítaním počtu kolónií pestovaných na agarových platniach. | MPN sa vypočíta porovnaním pozitívnych a negatívnych vzorov skúmaviek so štatistickou tabuľkou MPN. |
| Technika sériového riedenia | |
| Pred umiestnením vzoriek na agarové platne sa vykoná sériové riedenie. | Sériové riedenie sa normálne nevykonáva, keď sa vypočíta MPN |
| Metódy | |
| Metóda roztieracej dosky a metóda nalievania sú dva typy metód na získanie CFU. | Na získanie hodnoty MPN sa vykonáva fermentácia vo viacerých rúrach. |
Súhrn – CFU vs. MPN
Meranie mikrobiálneho rastu je potrebné z mnohých dôvodov. V závodoch na spracovanie potravín je potrebné merať úroveň a typ mikroorganizmov v potravinách. V potravinárstve a medicíne je potrebné zabezpečiť efektívne aplikovanie sterilizačných ošetrení. V čistiarňach odpadových vôd sa vyžaduje rutinné meranie počtu mikróbov. Pri optimalizácii postupu v molekulárnej biológii je potrebné merať počet kolónií na platniach. Preto sú k dispozícii rôzne metódy výpočtu a merania rastu. CFU a MPN sú dve takéto metódy široko používané v rôznych oblastiach. CFU je miera počtu životaschopných kolónií baktérií a húb prítomných v danej vzorke. Vypočítava sa pomocou štandardnej metódy počítania doštičiek alebo metódy počítania životaschopných doštičiek. MPN je ďalšou mierou, ktorá vyjadruje počet bakteriálnych buniek prítomných v danom objeme kvapalnej vzorky. Vypočítava sa pomocou metódy fermentácie vo viacerých skúmavkách a tabuľky MPN. Toto je rozdiel medzi CFU a MPN.
Stiahnuť PDF verziu CFU vs MPN
Môžete si stiahnuť PDF verziu tohto článku a použiť ju na offline účely podľa citácií. Stiahnite si PDF verziu tu Rozdiel medzi CFU a MPN.
