Kľúčový rozdiel – imunofluorescencia vs imunohistochémia
Diagnostika chorôb, ktorá využíva molekulárne biologické metódy, sa stala novou oblasťou klinickej laboratórnej technológie. Zahŕňa všetky testy a metódy na identifikáciu choroby a pochopenie príčiny choroby analýzou DNA, RNA alebo exprimovaných proteínov v organizme. Rýchly pokrok v molekulárnej diagnostike umožnil základný výskum prenosných a neprenosných chorôb. Tieto sa používajú na určenie zmien v úrovniach sekvencie alebo expresie v kľúčových génoch alebo proteínoch zapojených do ochorenia. Imunofluorescencia (IF) a imunohistochémia (IHC) sú dve také široko používané techniky v biológii rakoviny. IF je typ IHC, kde sa na analýzu monoklonálnych a polyklonálnych protilátok používa metóda fluorescenčnej detekcie, zatiaľ čo IHC používa chemické metódy na detekciu monoklonálnych a polyklonálnych protilátok. Toto je kľúčový rozdiel medzi IF a IHC.
Čo je imunofluorescencia (IF)?
Imunofluorescencia je detekčná technika, pri ktorej sa protilátky použité v teste označujú pomocou fluorescenčných farbív alebo fluorescenčných proteínov na účely detekcie. Označené sekundárne protilátky môžu viesť k nežiaducim signálom pozadia; preto je IF technika v súčasnosti založená na značení samotnej primárnej protilátky, aby sa zabránilo nežiaducim signálom počas detekcie. Prostredníctvom tejto techniky sa zabráni nešpecifickej väzbe medzi primárnou a sekundárnou protilátkou a je rýchlejšia, pretože nie je zahrnutý žiadny sekundárny inkubačný krok. Zlepšila sa aj kvalita dát.
Obrázok 01: Dvojité imunofluorescenčné farbenie pre BrdU, NeuN a GFAP
Fluorochrómy alebo fluorescenčné farbivá sú zlúčeniny, ktoré môžu absorbovať žiarenie, najlepšie ultrafialové žiarenie, ktoré je excitované. Keď častice dosiahnu základný stav z excitovaného stavu, vyžarujú žiarenie, ktoré je zachytené a detegované detektorom, čím sa vytvorí spektrum. Je veľmi dôležité, aby fluorescenčná značka bola kompatibilná a stabilná pre konkrétnu reakciu a mala by byť správne konjugovaná s protilátkou, aby sa získali presné výsledky. Jedným z najpoužívanejších fluorochrómov je fluoresceín izotiokyanát (FITC), ktorý je zelenej farby s absorpčnými a emisnými vrcholmi vlnových dĺžok 490 nm a 520 nm. Rodamín, ďalšie činidlo používané pri IF, má červenú farbu a má výrazné absorpčné a emisné vrcholové vlnové dĺžky 553 nm a 627 nm.
Čo je imunohistochémia (IHC)?
IHC je molekulárna testovacia metóda používaná na identifikáciu a potvrdenie prítomnosti antigénu v cieľovej bunke. Cieľovou bunkou môže byť infekčná častica, mikrobiálny patogén alebo malígna nádorová bunka. IHC využíva monoklonálne a polyklonálne protilátky na stanovenie prítomnosti antigénov prítomných na bunkovom povrchu cieľových buniek. Technika je založená na väzbe antigén-protilátka. Detekčný marker je konjugovaný s týmito protilátkami, aby sa zistila prítomnosť alebo neprítomnosť konkrétneho antigénu. Tieto markery môžu byť chemické markery, ako sú enzýmy, fluorescenčne označené protilátky alebo rádioaktívne označené protilátky.
Obrázok 02: Rez myšou a mozgom zafarbený imunohistochémiou
Najpopulárnejšia aplikácia IHC je v biológii rakovinových buniek na identifikáciu prítomnosti malígnych nádorov, ale používa sa aj na detekciu infekčných chorôb.
Aké sú podobnosti medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou?
- Imunofluorescencia a imunohistochémia prebiehajú v podmienkach in vitro.
- Obe techniky sú založené na antigén-protilátka
- Obe sú veľmi rýchle techniky.
- Výsledky techník sú reprodukovateľné.
- Obe majú lepšiu kvalitu dát.
- Tieto techniky používané pri diagnostike rakoviny a infekčných chorôb.
Aký je rozdiel medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou?
Imunofluorescencia vs imunohistochémia |
|
| IF je detekčná technika, pri ktorej sú protilátky použité v teste značené pomocou fluorescenčných farbív alebo fluorescenčných proteínov na detekciu. | IHC je detekčná technika, pri ktorej sa protilátky použité v teste označujú pomocou chemikálií alebo rádioaktívnych prvkov na detekciu. |
| Presnosť | |
| Presnosť techniky IF je vyššia v porovnaní s IHC. | V IHC je presnosť nižšia. |
| Špecifickosť | |
| IF je konkrétnejší. | IHC je menej špecifické. |
Zhrnutie – Imunofluorescencia vs imunohistochémia
Molekulárne mechanizmy priniesli mnohé zmeny v oblasti medicíny, vďaka čomu vznikli pokročilé metódy molekulárneho testovania, ktoré priniesli revolúciu v oblasti diagnostiky. Tieto vynálezy viedli k rýchlej a presnej identifikácii a potvrdeniu choroby, čím umožnili úspešné podávanie a výrobu liekov. Tieto techniky sa používajú aj vo farmakológii, aby sa našli ciele liečiv a potvrdili sa farmakokinetické vlastnosti liečiva počas metabolizmu liečiva. IF a IHC sú dve diagnostické metódy, ktoré sú založené na koncepte väzby antigénu a protilátky, aj keď sa spôsob detekcie v oboch technikách líši. IF používa princíp fluorescencie na detekciu antigénu a IHC používa koncept chemickej konjugácie na detekciu antigénu. Toto je rozdiel medzi IF a IHC.
Stiahnuť PDF verziu imunofluorescencie vs imunohistochémia
Verziu tohto článku si môžete stiahnuť vo formáte PDF a použiť ju na offline účely podľa citácie. Stiahnite si PDF verziu tu Rozdiel medzi imunofluorescenciou a imunohistochémiou.
