Kľúčový rozdiel – Imunocytochémia verzus imunohistochémia
Imunocytochémia (ICC) a imunohistochémia (IHC) sú dve široko používané techniky v molekulárnej diagnostike, ktoré identifikujú a potvrdzujú výskyt neprenosných aj prenosných chorôb na základe molekulárnych markerov prítomných na bunkách. Kľúčovým rozdielom imunocytochémie a imunohistochémie je molekula, ktorá sa v týchto technikách používa ako analytický postup. V ICC sa používajú primárne a sekundárne protilátky konjugované s markermi, ako je fluorescencia, zatiaľ čo IHC, monoklonálne a polyklonálne protilátky sa používajú na diagnostické stanovenia.
Čo je imunocytochémia (ICC)?
ICC využíva primárne a sekundárne protilátky naviazané na markery, ako sú fluorescenčné markery alebo enzýmy, a je výkonnou detekčnou metódou na detekciu antigénov prítomných na cieľových bunkách, ktorými môžu byť buď infekčné bunkové častice alebo rakovinové nádorové bunky. Na imunocytochémiu sú potrebné tri typy kontrol.
- Primárna protilátka – kontrola, ktorá ukazuje špecifickosť väzby primárnej protilátky na antigén
- Sekundárna protilátka – kontrola, ktorá ukazuje, že označenie je špecifické pre primárnu protilátku
- Kontroly štítkov – ukážte, že označenie je výsledkom pridaného štítka a nie výsledkom endogénneho označenia.
Obrázok 01: Imunocytochémia označuje jednotlivé proteíny v bunkách (tu je tyrozínhydroxyláza v axónoch sympatických autonómnych neurónov znázornená zelenou farbou).
Primárna protilátková kontrola je špecifická pre každú novú protilátku a nemôže sa opakovať pre každý experiment. Sekundárna protilátková kontrola je navrhnutá na základe primárnej protilátky použitej v experimente a je súčasťou každého experimentu. Kontrola označenia je zahrnutá, ak sa zmení podmienka postupu, vzorka alebo keď sa nájde neočakávané označenie.
Dve hlavné aplikácie ICC sú rádioimunitný test (RIA) a enzýmový imunosorbentný test (ELISA). Najčastejšie používanou protilátkou je imunoglobulín G.
Čo je imunohistochémia (IHC)?
V imunohistochémii zdrojová vzorka obsahuje monoklonálne a polyklonálne protilátky na stanovenie prítomnosti antigénov v cudzích bunkách. Táto technika je založená na špecifickej reakcii väzby antigén-protilátka. Protilátky používané pri detekcii môžu byť označené rôznymi markermi; môžu to byť fluorescenčné markery, rádioaktívne značené markery alebo chemické markery. Prostredníctvom uľahčenia väzby medzi antigénom a cieľovou protilátkou in vitro možno určiť prítomnosť alebo neprítomnosť konkrétneho proteínu bunky.
Obrázok 02: Imunohistochemické farbenie normálnej obličky pomocou CD10
V súčasnosti sa vedci podieľajú na vývoji cieľových protilátok pre špecifické antigény prítomné v bunkách, ktoré sa môžu vyvinúť buď ako bunky malígneho nádoru, alebo ako antigény prítomné v infekčných agens, ako je HIV.
Aké sú podobnosti medzi imunocytochémiou a imunohistochémiou?
- Reakcie sú vysoko špecifické a presné v ICC a IHC.
- Aplikácie ICC a IHC zahŕňajú diagnostiku rakoviny a infekčných chorôb.
- V oboch podmienkach by sa mali udržiavať sterilné podmienky a mali by sa vykonávať in vitro
- Obe techniky poskytujú reprodukovateľné výsledky.
- Obaja sú rýchle.
- Rádiové značenie, fluorescenčné techniky sa používajú ako metódy detekcie v ICC aj IHC.
- Obe sú založené na párovaní antigén-protilátka.
Aký je rozdiel medzi imunocytochémiou a imunohistochémiou?
Imunocytochémia (ICC) verzus imunohistochémia (IHC) |
|
| ICC používa primárne a sekundárne protilátky viazané markery, ako sú fluorescenčné markery alebo enzýmy, a je to výkonná detekčná metóda na detekciu antigénov prítomných v cieľových bunkách. | IHC je metóda, ktorá využíva monoklonálne a polyklonálne protilátky na určenie prítomnosti antigénov, ktoré sú špeciálnymi proteínovými markermi umiestnenými na povrchu buniek. |
| Vzorový zdroj | |
| Vzorky získané z tkanív, ktoré boli histologicky spracované na tenké rezy, sa používajú v ICC. | IHC používa vzorky pozostávajúce z buniek pestovaných v monovrstve alebo buniek v suspenzii, ktoré sú uložené na podložnom sklíčku. |
| Spracovanie vzorky | |
| V ICC by bunky mali byť priepustné, aby sa uľahčila penetrácia protilátok do vnútrobunkových cieľov. | V IHC sú bunky pred farbením fixované formalínom a zaliate do parafínu. |
Súhrn – Imunocytochémia verzus imunohistochémia
Molekulárna diagnostika sa používa na identifikáciu a potvrdenie výskytu neprenosných aj prenosných chorôb na základe molekulárnych markerov prítomných na bunkách. Molekulovými markermi môžu byť proteíny alebo sekvencie DNA alebo RNA; vývoj technológií, ako sú ICC a IHC, pripravil vedcom cestu na identifikáciu choroby a jej príčiny v ranom štádiu. ICC aj IHC závisia od špecifických reakcií medzi protilátkou a antigénom, hoci zdroj vzorky. Hlavným rozdielom medzi imunocytochémiou a imunohistochémiou je spracovanie vzoriek týchto dvoch postupov.
Stiahnuť PDF verziu Imunocytochémie vs Imunohistochémia
Verziu tohto článku si môžete stiahnuť vo formáte PDF a použiť ju na offline účely podľa citácie. Stiahnite si PDF verziu tu Rozdiel medzi imunocytochémiou a imunohistochémiou.
