Kľúčový rozdiel – In situ hybridizácia verzus imunohistochémia
Diagnostika rakoviny a infekčných chorôb je populárny trend, pri ktorom sa nové techniky založené na proteomike a genomike využívajú na účely identifikácie nádorov alebo infekčných buniek, ich proliferácie a miest bunkového vývoja a analýzy genetického základu väčšiny prenosných a neprenosné choroby. Výsledkom bude presné spracovanie a navrhovanie liekov a vývoj prispôsobených terapií chorôb. In situ hybridizácia (ISH) a imunohistochémia (IHC) sú dve také široko používané techniky v biológii rakoviny a kľúčový rozdiel medzi in situ hybridizáciou a imunochémiou spočíva v molekulách, ktoré sa používajú v postupe analýzy. Pri ISH sa pri analýze používajú sondy nukleových kyselín, zatiaľ čo pri IHC sa na diagnostické stanovenia používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky.
Čo je hybridizácia in situ (ISH)?
In situ hybridizácia je technika hybridizácie nukleových kyselín, ktorá sa vykonáva priamo na časti alebo časti tkaniva, v celom tkanive alebo v bunkách. Táto technika závisí od teórie Watson Crickovho komplementárneho párovania báz, výsledkom čoho sú hybridy DNA-DNA alebo hybridy DNA-RNA, ktoré dokážu detegovať mutované gény alebo identifikovať požadovaný gén. Jednovláknové sekvencie DNA, dvojvláknové sekvencie DNA, jednovláknové sekvencie RNA alebo syntetické oligonukleotidové sekvencie sa používajú ako sondy počas hybridizačnej techniky a tieto sondy sú označené rádioaktívnym fosforom na svojom 5' konci na identifikačné postupy pri autorádiografii alebo sú označené pomocou fluorescenčných farbív. K dispozícii sú rôzne typy techník ISH na základe typu použitej sondy a typu použitej vizualizačnej techniky.
Obrázok 01: Fluorescenčná hybridizácia in situ
Existuje mnoho aplikácií ISH, najmä v molekulárnej diagnostike infekčných chorôb s cieľom identifikovať prítomnosť patogénov a potvrdiť patogén prostredníctvom molekulárnej diagnostiky. Používa sa aj v oblasti vývojovej biológie, karyotypizácie a fylogenetickej analýzy a fyzikálneho mapovania chromozómov.
Čo je imunohistochémia (IHC)?
Pri technike IHC je hlavnou analyzovanou molekulou antigén. Počas IHC sa používajú monoklonálne a polyklonálne protilátky na stanovenie prítomnosti antigénov pri infekcii alebo stave proliferácie malígnych buniek. Technika je založená na väzbe antigén-protilátka a na túto techniku sa používajú enzýmové značky; jednou z takýchto aplikácií je ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay). Markery môžu byť tiež fluorescenčne označené protilátky alebo rádioaktívne označené protilátky.
Obrázok 02: Imunohistochémia
IHC sa široko používa na detekciu rakovinových buniek. Diagnostické postupy sa zameriavajú na antigény prítomné na nádorových bunkách na identifikáciu a charakterizáciu nádoru. Rovnaký postup sa používa na diagnostiku infekčných agens. Monoklonálne a polyklonálne protilátky sa tiež používajú na analýzu rôznych génových produktov tým, že umožňujú väzbovú reakciu protilátka-antigén medzi požadovaným proteínom a podávanou syntetickou protilátkou.
Aké sú podobnosti medzi in situ hybridizáciou a imunohistochémiou?
- ISH a IHC sú vysoko špecifické reakcie.
- Obe techniky sú vysoko presné.
- Obe techniky možno použiť pri diagnostike rakoviny a infekčných chorôb.
- Tieto techniky sa vykonávajú v sterilnom prostredí in-vitro.
- Obe sú rýchle techniky, ktoré poskytujú reprodukovateľné výsledky.
- ISH a IHC používajú metódy detekcie, ako je rádiové značenie a fluorescenčné techniky.
Aký je rozdiel medzi in situ hybridizáciou a imunohistochémiou?
In situ hybridizácia vs imunohistochémia |
|
| ISH je technika hybridizácie nukleových kyselín, ktorá sa vykonáva priamo na časti alebo časti tkaniva alebo na celom tkanive. | IHC je technika, pri ktorej sa monoklonálne a polyklonálne protilátky využívajú na stanovenie prítomnosti antigénov, čo sú špeciálne proteínové markery umiestnené na povrchu buniek. |
| Typ analyzovaných biomolekúl | |
| ISH analyzuje nukleové kyseliny. | IHC analyzuje proteíny-antigény. |
| Základ biochemickej reakcie | |
| Pri tejto technike dochádza ku komplementárnemu párovaniu báz medzi DNA-DNA alebo DNA-RNA. | Interakcie antigén-protilátka sa podieľajú na imunohistochémii. |
| Metódy detekcie spojené s enzýmom | |
| Metódy detekcie spojené s enzýmami nemožno použiť v ISH. | V IHC možno použiť metódy detekcie spojené s enzýmami. |
Zhrnutie – In situ hybridizácia vs imunohistochémia
Molekulárna diagnostika sú rýchle a potvrdzujúce metódy, ktoré možno použiť na identifikáciu neprenosnej choroby, ako je rakovina alebo prenosná choroba, ako je HIV alebo tuberkulóza, na základe molekulárnych markerov prítomných na bunkách, ktoré vedú k manifestácii choroby. Molekulárne markery môžu byť prítomné vo forme exprimovaných proteínov alebo na genetickej úrovni, na základe ktorej sa zavádzajú rôzne nové techniky na zvýšenie účinnosti a sú menej pracné, hoci s týmito technikami sú spojené vysoké náklady. ISH teda závisí od tvorby hybridu DNA-DNA alebo DNA-RNA a IHC závisí od špecifických reakcií medzi protilátkou a antigénom. Toto je rozdiel medzi hybridizáciou in situ.
Stiahnuť PDF verziu hybridizácie in situ vs imunohistochémia
Verziu tohto článku si môžete stiahnuť vo formáte PDF a použiť ju na offline účely podľa citácie. Stiahnite si PDF verziu tu Rozdiel medzi in situ hybridizáciou a imunohistochémiou.
