Kľúčový rozdiel medzi kompetitívnou a nekompetitívnou ELISA je v tom, že kompetitívna ELISA používa inhibičný antigén, zatiaľ čo nekompetitívna ELISA nepoužíva inhibičný antigén na analýzu.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) je imunologický test, ktorý zisťuje rôzne ciele, ako sú protilátky, antigény, proteíny a glykoproteíny. Je to rýchly a jednoduchý spôsob vykonávania. Preto sa častejšie používa na výskumné a diagnostické účely. ELISA zahŕňa použitie enzýmov a špecifickú väzbu protilátky a antigénu. Na základe toho, ako sa reakcie vyskytujú, existujú štyri typy ELISA: priama ELISA, nepriama ELISA, sendvičová ELISA a inhibičná ELISA. Priama, nepriama a sendvičová ELISA sú typmi nekompetitívnej ELISA, zatiaľ čo inhibičná ELISA je typom komplementárnej ELISA. Hlavným cieľom tohto článku je prediskutovať rozdiel medzi konkurenčným a nekonkurenčným testom ELISA.
Čo je kompetitívna ELISA?
Konkurenčná ELISA meria koncentráciu antigénu vo vzorke prostredníctvom detekcie interferencie signálu. Tu test používa inhibítorový antigén. Ide teda o typ inhibičnej ELISA. Počas tohto postupu antigény prítomné vo vzorke súťažia s vybraným referenčným antigénom o väzbu na špecifické množstvo značenej protilátky. Okrem toho tento postup začína inkubáciou vzorky s prebytočným množstvom značenej protilátky. Referenčný antigén by mal byť tiež vopred potiahnutý na viacjamkovej testovacej doštičke. Potom by sa zmes vzoriek mala pridať na testovaciu doštičku, ktorá obsahuje referenčný antigén. Voľné protilátky sa naviažu na referenčný antigén v závislosti od množstva antigénu vo vzorke. Ak je teda prítomných viac antigénu vzorky, deteguje sa menej referenčného antigénu. Vytvára tak slabší signál.
Obrázok 01: ELISA
Naproti tomu, keď vzorka obsahuje menšie množstvo antigénu, viac a viac referenčného antigénu obsadí protilátky a poskytne silný signál. Keďže kompetitívna ELISA poskytuje silnejší signál, keď vzorka obsahuje nízke množstvo antigénov, kompetitívna ELISA je veľmi citlivá analýza, dokonca aj pre vzorky s malým počtom antigénov.
V niektorých konkurenčných súpravách ELISA sa namiesto značenej protilátky používa značený antigén. Tu budú značený antigén a antigén vzorky súťažiť o väzbu na primárnu protilátku. Podobne, keď je množstvo antigénu vo vzorke nízke, množstvo značeného antigénu, ktorý sa viaže na protilátky, bude vyššie a vytvorí silnejší signál.
Čo je nekompetitívna ELISA?
Zo štyroch typov ELISA sú tri typy nekompetitívne ELISA. Sú to priama ELISA, nepriama ELISA a sendvičová ELISA. Všetky tri formáty fungujú na spoločnom princípe ELISA s malými rozdielmi v ich metodológii.
Priama ELISA používa enzýmom značenú primárnu protilátku. Preto nevyžaduje sekundárnu protilátku. Preto je priama ELISA rýchlejšia ako iné typy ELISA. Primárna protilátka sa bude priamo viazať na imobilizovaný cieľový antigén, ktorý je prítomný v platni. Preto prebehne reakcia enzým-substrát, ktorá vytvorí viditeľný signál.
Obrázok 02: Sendvičová ELISA
Na rozdiel od priamej ELISA, nepriama ELISA používa neznačenú primárnu protilátku a enzýmom značenú sekundárnu protilátku. Akonáhle sa primárna protilátka naviaže na imobilizovaný antigén, sekundárna protilátka sa naviaže na primárnu protilátku. Enzým v sekundárnej protilátke bude reagovať s antigénom a vytvorí viditeľný signál. Sendvičová ELISA sa líši od priamej aj nepriamej ELISA. Tu je protilátka imobilizovaná na stene testovacej platne.
Aké sú podobnosti medzi kompetitívnym a nekonkurenčným testom ELISA?
- Konkurenčná a nekonkurenčná ELISA sú dva typy techník imunosorbentných testov.
- Sú to vysoko flexibilné a citlivé techniky.
- Navyše, kompetitívne aj nekompetitívne ELISA sú enzýmovo viazané imunotesty.
- Obe metódy tiež generujú signál v dôsledku reakcie enzým-substrát.
Aký je rozdiel medzi kompetitívnym a nekonkurenčným testom ELISA?
Konkurenčná ELISA je typ ELISA, ktorý sa spolieha na dokončenie medzi antigénom analytu a značeným antigénom pre obmedzené množstvo špecifickej protilátky. Na druhej strane neexistuje žiadna takáto konkurencia medzi požadovaným antigénom a referenčným antigénom v nekompetitívnej ELISA. Toto je kľúčový rozdiel medzi konkurenčným a nekonkurenčným testom ELISA. Podobne kompetitívna ELISA je inhibičná ELISA, zatiaľ čo nekompetitívna ELISA nie je inhibičná ELISA. Toto je tiež rozdiel medzi konkurenčným a nekonkurenčným testom ELISA.
Navyše, kompetitívna ELISA je vhodnejšia na meranie nízkeho množstva požadovaného antigénu. Je to citlivá metóda. Na druhej strane nekompetitívna ELISA nezávisí od počtu antigénov prítomných vo vzorke. Preto je to tiež rozdiel medzi konkurenčnou a nekonkurenčnou ELISA.
Infografika nižšie vysvetľuje rozdiel medzi kompetitívnym a nekonkurenčným testom ELISA.
Súhrn – Konkurenčná verzus nekonkurenčná ELISA
Konkurenčná a nekompetitívna ELISA sú dva hlavné typy ELISA alebo enzýmovo viazaných imunosorbentných testov. Pri zhrnutí rozdielu medzi kompetitívnou a nekompetitívnou ELISA, kompetitívna ELISA sa spolieha na kompetíciu medzi požadovaným antigénom a referenčným antigénom voči obmedzenému množstvu protilátok. Preto sa kompetitívna ELISA nazýva aj inhibičná ELISA. Na druhej strane, nekompetitívna ELISA sa nespolieha na konkurenciu medzi cieľovými antigénmi a referenčnými antigénmi. Využíva nadbytok značenej špecifickej protilátky voči sledovanému analytu. Toto je kľúčový rozdiel medzi konkurenčným a nekonkurenčným testom ELISA. Priama ELISA, nepriama ELISA a sendvičová ELISA sú tri hlavné typy nekonkurenčných ELISA.
