Kľúčový rozdiel medzi bradfordským a Lowryho proteínovým testom je v tom, že Bradfordský proteínový test je založený na posune absorbancie farbiva Coomassie brilantná modrá G-250, zatiaľ čo Lowryho proteínový test je založený na reakcii iónov medi (Cu+) vzniká oxidáciou peptidových väzieb Folinovým-Cioc alteuovým činidlom.
Assay je analytická technika, ktorá pomáha charakterizovať hlavné funkčné zložky vzorky. Test teda môže byť buď kvalitatívny alebo kvantitatívny test. Mnohé oblasti vrátane laboratórnej medicíny, farmakológie, biológie životného prostredia, molekulárnej biológie, biochémie a imunológie používajú tento druh testov rutinne. Bradford a Lowryho proteínový test sú dva biochemické testy, ktoré určujú koncentráciu proteínu v roztoku vzorky. Obidva testy používajú na poskytnutie výsledkov kolorimetrické techniky.
Čo je Bradford Protein Assay?
Bradfordský proteínový test je rýchly spektroskopický analytický postup na analýzu proteínov. Vykazuje vysokú presnosť pri meraní koncentrácie bielkovín v roztoku. Marion Bradford zaviedla tento postup v roku 1976. V tomto teste je celková reakcia založená na zložení aminokyselín meraných proteínov. Inými slovami, Bradfordský proteínový test je kolorimetrický test. Používa farbivo Coomassie brilantná modrá. Preto tento kolorimetrický proteínový test závisí od posunu absorbancie farbiva. Coomassie brilantná modrá G-250 existuje v troch formátoch: katiónový (červený), aniónový (modrý) a neutrálny (zelený). Počas kyslých podmienok sa červená forma farbiva premení na modrú. Potvrdzuje väzbu proteínu. Ak proteín nie je prítomný, roztok môže zostať hnedý.
Obrázok 01: Bradfordský proteínový test
Bradfordský proteínový test sa líši od iných proteínových testov, pretože je menej citlivý na interferenciu rôznych chemických zlúčenín prítomných v proteínovom roztoku. Tieto zlúčeniny zahŕňajú sodík, draslík, glukózu a sacharózu atď.
Čo je Lowryho proteínový test?
Lowry proteínový test je biochemický test používaný na stanovenie celkovej hladiny proteínu v roztoku. Oliver H. Lowry je osobou, ktorá vyvinula toto činidlo v roku 1940. Postup zobrazuje celkovú koncentráciu proteínu v roztoku zmenou farby, ktorá je úmerná koncentrácii proteínu v roztoku. Ide teda aj o kolorimetrický proteínový test.
Základom tohto postupu je reakcia medzi iónmi medi (Cu+) produkovanými oxidáciou peptidových väzieb a Folin-Cioc alteuovým činidlom. Toto činidlo tiež obsahuje kyselinu fosfomolybdénovú a kyselinu fosforovo-wolfrámovú. Reakčný mechanizmus Lowryho proteínového testu však nie je dobre známy. Zahŕňa však oxidáciu cysteínových, tryptofánových a tyrozínových zvyškov redukciou Folin-Cioc alteuovho činidla.
Obrázok 02: Lowryho proteínový test
Cysteinové zvyšky prispievajú k absorbancii pozorovanej v Lowryho proteínovom teste a výsledkom reakcie je žiarivo modrá molekula; heteropoly molybdénová modrá. Redukcia tejto molekuly sa meria absorbanciou pri 660 nm. Preto koncentrácia cysteínových a tryptofánových zvyškov, ktorá redukovala Folin-Cioc alteuovo činidlo, odvodzuje celkovú koncentráciu proteínu v roztoku.
Aké sú podobnosti medzi Bradfordovým a Lowryho proteínovým testom?
- Bradford a Lowryho proteínové testy určujú koncentráciu proteínu v roztoku.
- Obe metódy sú kolorimetrické metódy.
- Aj citlivosť oboch metód je vysoká.
Aký je rozdiel medzi Bradfordovým a Lowryho proteínovým testom?
Bradfordský a Lowryho proteínový test sú dva typy testov, ktoré určujú koncentráciu proteínu v roztoku. Bradfordský proteínový test sa spolieha na posun absorbancie farbiva Coomassie brilantná modrá G-250, zatiaľ čo Lowryho proteínový test závisí od reakcie iónov medi produkovaných oxidáciou peptidových väzieb s Folin-Cioc alteuovým činidlom. Toto je kľúčový rozdiel medzi Bradfordovým a Lowryho proteínovým testom. Bradfordský proteínový test trvá 15 minút, kým sa dosiahne výsledok, zatiaľ čo Loweryho proteínový test trvá 40-60 minút, kým sa dosiahne výsledok. Toto je ďalší rozdiel medzi Bradfordovým a Lowryho proteínovým testom. Okrem toho je Bradfordský proteínový test závislý od zloženia aminokyselín, zatiaľ čo Lowryho proteínový test je čiastočne závislý od zloženia aminokyselín. Preto je to tiež rozdiel medzi Bradfordovým a Lowryho proteínovým testom.
Informácie nižšie poskytujú ďalšie podrobnosti o rozdieloch medzi Bradfordovým a Lowryho proteínovým testom.
Súhrn – Bradford vs Lowryho proteínový test
Rozbor je analytická technika používaná na charakterizáciu hlavnej funkčnej zložky vzorky. Bradford a Lowry proteínový test sú dva typy proteínových testov, ktoré fungujú pri kolorimetrických technikách. Bradford aj Lowryho proteínové testy určujú koncentráciu proteínu v roztoku. Kľúčový rozdiel medzi testom Bradford a Lowry Protein Assay však spočíva v kolorimetrickej technike, ktorú používajú. Bradfordský proteínový test používa Coomassie brilantnú modrú G-250, zatiaľ čo Lowryho proteínový test používa ióny medi (Cu+) a Folin-Cioc alteuovo činidlo. Okrem toho Bradfordova metóda poskytuje rýchle výsledky ako Lowryho proteínový test. Obe metódy sú však vysoko citlivé metódy a podliehajú interferenciám rôznych látok.
