Kľúčový rozdiel medzi BCA a Bradfordovým testom je ten, že BCA test je časovo náročný a menej presný, zatiaľ čo Bradfordov test je rýchly a presný.
BCA a Bradfordova skúška sú dve metódy stanovenia koncentrácie proteínu. Tieto dva testy majú rozdielne princípy testovania a rozdiely v ich presnostiach.
Čo je to BCA test?
BCA test alebo test bicinchonínovej kyseliny je biochemický test užitočný na stanovenie celkovej koncentrácie proteínu v roztoku. Táto metóda je tiež pomenovaná ako Smithova skúška po jej vynálezcovi Paulovi K. Smithovi. Táto analytická metóda ukazuje podobnosti s Lowryho proteínovým testom, Bradfordovým proteínovým testom alebo biuretovým činidlom. Celkovú koncentráciu bielkovín v danej vzorke môžeme pozorovať prostredníctvom zmeny farby roztoku vzorky, ktorá prechádza zo zelenej na fialovú. K tejto zmene farby dochádza úmerne k obsahu bielkovín. Potom môžeme použiť kolorimetrickú techniku na analýzu intenzity farby a obsahu bielkovín vo vzorke.
BCA metóda odhadu bielkovín
Keď vezmeme do úvahy mechanizmus testu BCA, typický roztok BCA obsahuje vysoko alkalický roztok s pH takmer 11,25 a zložky v tomto roztoku zahŕňajú kyselinu bicinchonínovú, uhličitan sodný, hydrogénuhličitan sodný, tartrát sodný a pentahydrát síranu meďnatého. Tento test primárne závisí od dvoch chemických reakcií: redukcia medi(II) na meď(I) peptidovými väzbami v proteíne a chelatácia dvoch molekúl kyseliny bicinchonínovej s iónom medi(I), výsledkom čoho je purpurovo sfarbený komplex, ktorý môže absorbuje svetlo pri vlnovej dĺžke 562 nm. V prvej reakcii je množstvo medi(II) redukované peptidovými väzbami úmerné množstvu proteínu vo vzorke.
Čo je Bradford Assay?
Bradfordov test je spektroskopická analytická metóda užitočná pri meraní koncentrácie proteínu v roztoku. Túto metódu vyvinula Marion M. Bradford v roku 1976 a je to pomerne rýchla a presná metóda.
Farebná reakcia proteínu a Bradfordovho činidla
Túto metódu môžeme použiť na určenie koncentrácie množstva proteínu vo vzorke. Chemická reakcia, ktorá prebieha vo vzorke počas tohto testu, závisí výlučne od zloženia aminokyselín proteínu vo vzorke.
Bradfordova metóda odhadu bielkovín
Pri posudzovaní metódy tohto testu ide o kolorimetrický proteínový test, ktorý je založený na posune absorbancie farbiva s názvom Coomassie Brilliant Blue G-250. Vo všeobecnosti toto farbivo existuje v troch formách ako aniónová (modrá) forma, neutrálna (zelená) forma a katiónová (červená) forma. Preto v kyslom prostredí farbivo mení svoju farbu z červenej na modrú. Je to kvôli väzbe proteínu s farbivom. Naopak, ak sa s farbivom nenaviaže žiadny proteín, zmena farby sa neprejaví, roztok získa červenohnedú farbu. Toto farbivo je schopné vytvoriť silný, nekovalentný komplex s karboxylovou skupinou proteínu prostredníctvom Van der Waalových síl a elektrostatických príťažlivostí.
Aký je rozdiel medzi BCA a Bradfordovým testom?
BCA a Bradfordova skúška sú dve metódy stanovenia koncentrácie proteínu. Tieto dva testy majú odlišné princípy testu a rozdiely v ich presnosti. Kľúčový rozdiel medzi BCA a Bradfordovým testom je v tom, že BCA test je časovo náročný a menej presný, zatiaľ čo Bradfordov test je rýchly a presný.
Nasledujúca infografika sumarizuje rozdiely medzi BCA a Bradfordovým testom v tabuľkovej forme.
Súhrn – BCA vs Bradford Assay
BCA test alebo test bicinchonínovej kyseliny je biochemický test užitočný na stanovenie celkovej koncentrácie proteínu v roztoku. Bradfordov test je spektroskopická analytická metóda užitočná pri meraní koncentrácie proteínu v roztoku. Kľúčový rozdiel medzi BCA a Bradfordovým testom je ten, že BCA je časovo náročný a menej presný, zatiaľ čo Bradfordov test je rýchly a presný.
