Kľúčový rozdiel medzi kvasinkami s jedným hybridom a kvasinkami s dvojhybridom je v tom, že kvasinkový jeden hybrid je in vitro test na analýzu interakcií DNA-proteín, zatiaľ čo kvasinkový dvojhybrid je in vitro test na analýzu interakcií proteín-proteín.
Štúdium interakcií medzi bunkovými molekulami môže pomôcť definovať rozpoznávacie miesta zapojené do génovej expresie a proteínových dráh. Interakcie DNA a proteínov sú neoddeliteľnou súčasťou bunkových procesov, ako sú modifikácie DNA a regulácia transkripcie atď. Na druhej strane interakcie proteínov a proteínov hrajú zásadnú úlohu v bunkových procesoch, ako je replikácia, transkripcia, translácia a prenos signálu. Preto je kriticky dôležité identifikovať tieto interakcie bunkových molekúl pomocou rôznych testov. Kvasinkový jeden hybrid a kvasinkový dvojhybrid sú dva in vitro testy na analýzu interakcií DNA-proteín a proteín-proteín.
Čo je Yeast One Hybrid?
Yeast one hybrid (Y1H) je in vitro test na analýzu vnútrobunkových interakcií DNA-proteín. Túto metódu prvýkrát zaviedli Wang a Reed v roku 1993. Odvtedy preukázala väčšiu silu v biologickom výskume. V tomto teste sú dve hlavné zložky: DNA návnada a proteínová korisť.
Obrázok 01: Yeast One Hybrid
V tomto postupe sa sekvencia DNA (návnada DNA) najskôr klonuje pred dvoma rôznymi reportérmi (HIS3, LacZ). Tieto reportérové konštrukty sú integrované do genómu kvasinkového kmeňa. Transkripčné faktory sa berú ako bielkovinové koristi. Transkripčné faktory sú fúzované s transkripčnou aktivačnou doménou (AD) kvasinkového Gal4 transkripčného faktora, aby sa vytvorili hybridné proteíny. Celý tento hybridný proteín je integrovaný do plazmidu pred jeho zavedením do kvasinkového kmeňa. Po zavedení rekombinantného plazmidu, keď transkripčný faktor interaguje s DNA fragmentom, AD časť aktivuje expresiu reportérového génu (HIS3 alebo LacZ). Sekvenovanie plazmidov umožňuje identifikáciu transkripčného faktora, ktorý sa môže viazať na fragment DNA. Nedávno sa na výskum diagnostiky chorôb použila kvasinková jedna hybridná metóda. Preto sa v budúcnosti tento test bude viac používať vo vedeckom výskume a liečebných postupoch.
Čo je Yeast Two Hybrid?
Yeast two hybrid (Y2H) je in vitro test na analýzu vnútrobunkových proteínových a proteínových interakcií. Túto metódu pôvodne našli Stanley Fields a Ok-Kyu Song v roku 1989. Táto technika zisťuje interakcie proteín-proteín pomocou Gal4 transkripčného faktora kvasiniek.
Obrázok 02: Yeast Two Hybrid
Pri tejto metóde sa najprv skonštruujú dve fúzie (hybridy) s použitím požadovaných proteínov: fúziou jedného proteínu s DNA viažucou doménou (DBD) a fúziou druhého proteínu s aktivátorovou doménou (AD) transkripčného faktora Gal4. Proteín fúzovaný s DBD je známy ako návnada, zatiaľ čo proteín fúzovaný s AD je známy ako korisť. V kvasinkovom kmeni sa po interakcii návnady a koristi dostanú DBD a AD do tesnej blízkosti, aby sa vytvoril funkčný transkripčný faktor Gal4 upstream od reportérového génu. Funkčný transkripčný faktor aktivuje expresiu reportérového génu. Okrem toho sa táto metóda v súčasnosti používa na skríning interakcií integrálnych membránových proteínov v bunkách cicavcov.
Aké sú podobnosti medzi hybridom Yeast One a Yeast Two Hybrid?
- Kvasinkový jeden hybrid a kvasinkový dvojhybrid sú dva in vitro testy na analýzu interakcií DNA-proteín a proteín-proteín.
- Tieto testy používajú kvasinkové kmene.
- Oba testy využívajú aktivačnú doménu (AD) transkripčného faktora Gal4.
- Na detekciu interakcií používajú expresiu reportérového génu (HIS3 alebo LacZ).
- Majú návnadu a korisť.
- Oba testy sú veľmi užitočné v modernom biologickom výskume.
Aký je rozdiel medzi Yeast One Hybrid a Yeast Two Hybrid?
Yeast one hybrid je in vitro test na analýzu interakcií DNA a proteínov, zatiaľ čo kvasinkový dvojhybrid je in vitro test na analýzu interakcií proteínov a proteínov. Toto je kľúčový rozdiel medzi kvasinkami s jedným hybridom a dvojhybridom kvasiniek. Okrem toho v jednom hybride kvasiniek je návnada fragment DNA a korisť je molekula proteínu. Na druhej strane, v dvoch hybridoch kvasiniek sú návnadou aj korisťou proteínové molekuly.
Nižšie uvedená infografika uvádza rozdiely medzi kvasinkami s jedným hybridom a dvojhybridom kvasiniek v tabuľkovej forme na porovnanie vedľa seba.
Zhrnutie – Yeast One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Kvasnice jeden hybrid a kvasinky dvojhybrid sú dve dôležité in vitro analýzy. Kvasinkový jeden hybrid je in vitro test na analýzu interakcií DNA a proteínov, zatiaľ čo kvasinkový dvojhybrid je in vitro test na analýzu proteínových a proteínových interakcií. Toto je kľúčový rozdiel medzi kvasinkami s jedným hybridom a dvojhybridom kvasiniek.
