Kľúčový rozdiel medzi imunoprecipitáciou a koimunoprecipitáciou je v tom, že imunoprecipitácia je technika, ktorá vyzráža proteín z roztoku pomocou špecifickej protilátky, zatiaľ čo koimunoprecipitácia je technika, ktorá vyzráža intaktné proteínové komplexy z roztoku pomocou špecifickej protilátky.
Interakcia antigén-protilátka je špecifická chemická interakcia medzi protilátkami produkovanými B bunkami a antigénmi (proteínmi) počas imunitnej reakcie. Normálne sa rozpustné antigény kombinujú s rozpustnými protilátkami v prítomnosti elektrolytu pri rozpustnej teplote a pH, aby vytvorili nerozpustný viditeľný komplex. Toto sa nazýva precipitačná reakcia. Preto sú imunoprecipitácia a koimunoprecipitácia dva typy precipitačných reakcií, ktoré sa bežne používajú v laboratóriách na identifikáciu proteínov, ako sú antigény.
Čo je imunoprecipitácia?
Imunoprecipitácia je technika vyzrážania proteínu z roztoku pomocou špecifickej protilátky. Niekedy je táto technika známa aj ako individuálna proteínová imunoprecipitácia. Imunoprecipitácia využíva protilátku na izoláciu vybraného požadovaného proteínu z bunkového lyzátu. Protilátka čistí svoj špecifický cieľový proteín alebo antigén zo zmesi. Protilátka sa naviaže na proteín a komplex protilátka-antigén sa vytiahne zo vzorky. V experimentálnom usporiadaní sa komplex antigén-protilátka vytiahne pomocou agarózy alebo magnetických guľôčok spojených s proteínom A/G. Neskôr sa guľôčky premyjú a požadovaný proteín sa eluuje. Vyčistený proteín alebo antigén získaný imunoprecipitáciou sa overí rôznymi technikami, ako je enzýmová imunoanalýza (ELISA) a western blot (WB).
Obrázok 01: Imunoprecipitácia
Okrem toho môžu byť izolované proteíny alebo antigény kvantifikované a identifikované pomocou hmotnostnej spektrometrie s použitím enzymatických vzorcov trávenia založených na primárnej sekvencii. Pred začatím imunoprecipitačného experimentu je potrebné vziať do úvahy: výber formátu metódy, viazanie proteínov a guľôčok, výber správnej primárnej protilátky a izotypu a negatívna kontrola.
Čo je koimunoprecipitácia?
Koimunoprecipitácia je technika vyzrážania intaktných proteínových komplexov z roztoku pomocou špecifickej protilátky. Koimunoprecipitácia vo všeobecnosti funguje tak, že sa vyberie špecifická protilátka, ktorá sa zameriava na známy proteín (antigén), o ktorom sa predpokladá, že je členom väčšieho komplexu proteínov. Zacielením na známy člen špecifickou protilátkou je možné vytiahnuť celý proteínový komplex z roztoku. To umožňuje identifikáciu neznámych členov komplexu. Koncept vyťahovania proteínových komplexov z roztoku sa niekedy označuje ako mechanizmus sťahovania.
Obrázok 02: B Koimunoprecipitácia
Koimunoprecipitácia je výkonná technika, ktorá sa používa na analýzu interakcií proteín-proteín. Hlavným účelom koimunoprecipitácie je identifikácia interagujúcich partnerov, ako sú ligandy, kofaktory alebo signálne molekuly pre požadovaný proteín. Okrem toho je koimunoprecipitácia účinnou technikou, ktorá sa používa na oddelenie proteínov zo séra, bunkového lyzátu, homogenizovaného tkaniva alebo kondicionovaného média.
Aké sú podobnosti medzi imunoprecipitáciou a koimunoprecipitáciou?
- Imunoprecipitácia a koimunoprecipitácia sú dva typy techník založených na precipitačnej reakcii.
- Obe techniky možno použiť na identifikáciu cieľového antigénu prostredníctvom špecifickej protilátky.
- Obe techniky silne závisia od interakcie antigén-protilátka.
- Bežne sa používajú v klinických laboratóriách.
Aký je rozdiel medzi imunoprecipitáciou a koimunoprecipitáciou?
Imunoprecipitácia je technika, ktorá vyzráža proteín z roztoku pomocou špecifickej protilátky, zatiaľ čo koimunoprecipitácia je technika, ktorá vyzráža intaktné proteínové komplexy z roztoku pomocou špecifickej protilátky. Toto je kľúčový rozdiel medzi imunoprecipitáciou a koimunoprecipitáciou. Okrem toho sa v laboratóriách častejšie používa imunoprecipitácia, zatiaľ čo koimunoprecipitácia sa v laboratóriách bežne nepoužíva.
Nižšie uvedená infografika predstavuje rozdiely medzi imunoprecipitáciou a koimunoprecipitáciou v tabuľkovej forme na porovnanie vedľa seba.
Zhrnutie – Imunoprecipitácia verzus koimunoprecipitácia
Imunoprecipitácia a koimunoprecipitácia sú dva typy techník založených na precipitačnej reakcii, ktoré závisia od interakcie antigén-protilátka. Technika imunoprecipitácie precipituje proteín z roztoku pomocou špecifickej protilátky, zatiaľ čo technika koimunoprecipitácie vyzráža intaktné proteínové komplexy z roztoku pomocou špecifickej protilátky. Toto sumarizuje rozdiel medzi imunoprecipitáciou a koimunoprecipitáciou.
