Kľúčový rozdiel – RPMI oproti DMEM
Väčšina výskumných štúdií zahŕňa kultiváciu živočíšnych buniek, a preto tieto štúdie vyžadujú udržiavanie živočíšnych bunkových línií v špeciálnych rastových podmienkach. Kultivácia živočíšnych buniek sa široko vykonáva vo farmakologických štúdiách na identifikáciu metabolizmu liečiv, pri diagnostike chorôb a pri výskume rakoviny. Bunkové kultivačné médiá sú dôležitým aspektom živočíšnej bunkovej kultúry. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) a Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) sú dve kultivačné médiá používané pri kultivácii živočíšnych buniek. RPMI je médium široko používané na kultiváciu cicavčích buniek v suspenznej kultúre. DMEM je modifikovaný typ základného média so zvýšenými koncentráciami aminokyselín a vitamínov až štvornásobne. DMEM sa používa pri kultivácii buniek v adherentných kultúrach. Kľúčovým rozdielom medzi týmito dvoma médiami je typ kultúry médií. RPMI sa používa na suspenzné kultúry, zatiaľ čo DMEM sa používa na kultiváciu adherentných buniek.
Čo je RPMI?
RPMI alebo médium Roswell Park Memorial Institute sa označuje aj ako RPMI 1640. Názov média odvodil inštitút, v ktorom bolo médium objavené. Toto médium sa bežne používa v kultúre živočíšnych buniek, najmä na rast buniek cicavcov. Pôvodne boli vyvinuté na rast ľudských lymfocytov.
Nasledovné zložky sú zahrnuté v RPMI.
- Glukóza
- indikátor pH (fenolová červená)\
- Soli (chlorid sodný, hydrogénuhličitan sodný, fosforečnan sodný, chlorid draselný, síran horečnatý a dusičnan vápenatý)
- Aminokyseliny
- Vitamíny (i-inozitol, cholínchlorid, kyselina para-aminobenzoová, kyselina listová, nikotínamid, pyridoxín hydrochlorid, tiamín hydrochlorid, pantotenát vápenatý, biotín a riboflavín, kyanokobalamín)
Špeciálnou vlastnosťou RPMI je zvýšená koncentrácia fosfátov v médiu. RPMI sa používa v 5% atmosfére oxidu uhličitého. To poskytne maximálne a optimálne podmienky pre rast buniek. pH média sa udržiava na hodnote 8,0 pomocou bikarbonátového pufrovacieho systému.
Obrázok 01: Bunková kultúra na Petriho miske
Aplikácie RPMI v kultivácii buniek
- Kultivácia ľudských T a B lymfocytov, buniek kostnej drene a hybridómov.
- Používa sa na štúdium ľudských neoplastických buniek.
Čo je DMEM?
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) je modifikované médium, ktoré je komerčne pripravené. Pôvodná textúra stredného prášku je žltá. V DMEM sa koncentrácia vitamínov zvyšuje až štvornásobne, čím sa zvyšuje obsah živín v médiu.
DMEM je tiež modifikovaný pridaním ďalších solí, ako je dusičnan železitý, pyruvát sodný a niektoré neesenciálne aminokyseliny, ako je serín a glycín. Formulácia glukózy v médiu je tiež zmenená. Pôvodná formulácia pozostáva z 1000 mg/l glukózy, zatiaľ čo v DMEM je koncentrácia zvýšená až na 4500 mg/l. DMEM tiež vyžaduje doplnenie sérového média, pretože to nie je kompletné médium. Najčastejšie sa DMEM dopĺňa fetálnym bovinným sérom (FBS). FBS poskytuje potrebné proteíny a rastové faktory pre proces kultivácie.
Hodnota pH média sa mení po pridaní hydrogénuhličitanu sodného. pH média pred pridaním hydrogenuhličitanu sodného je okolo 6,80 – 7,40, zatiaľ čo pH po pridaní hydrogenuhličitanu sodného je v rozsahu 7,60 – 8,20. Skladovacia teplota média je 2 – 8 0C.
Obrázok 02: DMEM
Aplikácie DMEM
- Študovať schopnosť polyomavírusu vytvárať plaky v myších embryonálnych bunkách.
- V štúdiách kontaktnej inhibície.
- Vo výskume a analýze kultúr kuracích buniek.
Aké sú podobnosti medzi RPMI a DMEM?
- Pri kultúre živočíšnych buniek sa používajú RPMI aj DMEM.
- Médiá RPMI aj DMEM sú tekuté prípravky.
- Média RPMI aj DMEM obsahujú esenciálne aminokyseliny, vitamíny a anorganické soli potrebné pre rast.
- Médiá RPMI aj DMEM sú neúplné. Preto by sa malo pridať sérum.
- Médiá RPMI aj DMEM používajú glukózu ako zdroj uhlíka.
- Médiá RPMI aj DMEM majú vyššie pH.
Aký je rozdiel medzi RPMI a DMEM?
RPMI vs DMEM |
|
| RPMI je médium široko používané na kultiváciu buniek cicavcov v suspenznej kultúre. | DMEM je upravený typ základného média so zvýšenou koncentráciou aminokyselín a vitamínov. |
| Prítomnosť extra fosfátov | |
| Prítomné v RPMI. | Neprítomný v DMEM. |
| Použitie | |
|
Používa sa na kultiváciu buniek v adherentných kultúrach. Je zvyknutý,
|
| Typy kultúry | |
| RPMI sa používa na suspenzné kultúry. | DMEM sa používa pre kultúry s priľnutými bunkami. |
Zhrnutie – RPMI vs DMEM
RPMI aj DMEM sa široko používajú pri kultivácii živočíšnych buniek, najmä na kultiváciu živočíšnych bunkových línií vrátane lymfocytov in vitro. DMEM je modifikované základné médium, kde je zvýšená koncentrácia živín. RPMI vyvinuté inštitútom Roswell Park Memorial Institute a je to tiež médium používané pri kultivácii živočíšnych buniek, najmä pre lymfocyty cicavcov. Obe médiá sú komerčne dostupné. Toto je rozdiel medzi RPMI a DMEM.
