Kľúčový rozdiel – primárna bunková kultúra a bunková línia
Oblasť výskumu sa výrazne zmenila zavedením kultivácie buniek a používaním bunkových línií na výskum. Na umelo pripravených bunkách a bunkových líniách sa robia rôzne testy s cieľom posúdiť správanie bunky. Väčšina výskumu na ľuďoch vyžaduje kultiváciu buniek a bunkové línie na overenie výsledkov, najmä ak sú výskumné štúdie založené na farmakológii a objave liekov. Primárna bunková kultúra je kultúra pripravená priamou izoláciou buniek mechanickými alebo enzymatickými metódami. Bunková línia sa pripraví kontinuálnym pasážovaním primárnej bunkovej kultúry, aby sa získala bunková línia, ktorá získala homológne znaky. Kľúčový rozdiel medzi primárnou bunkovou kultúrou a bunkovou líniou je počet pasáží, ktoré každá z nich má. Primárna bunková kultúra sa izoluje priamo, zatiaľ čo bunková línia sa pripravuje niekoľkonásobným pasážovaním primárnej bunkovej kultúry.
Čo je primárna bunková kultúra?
Primárna bunková kultúra je príprava bunkovej kultúry izolovaním buniek priamo zo zdroja pomocou mechanických alebo enzymatických metód. Bunky sa izolujú trypsinizačnými alebo netrypsinizačnými metódami. Primárne bunkové kultúry sa pestujú vo vhodnom rastovom médiu, ktoré obsahuje rastové faktory, hormóny, lipidy a ďalšie nedefinované zložky. Niektoré médiá musia byť sprevádzané sérom. Médiá zabezpečujú, že podmienky pre rast sú optimalizované a bunky prežívajú v optimálnych podmienkach. Bunky môžu byť izolované z rôznych tkanivových zdrojov, ako je pečeňové tkanivo, endotel a nervové tkanivo u ľudí alebo vyšších zvierat prostredníctvom trypsinizácie.
Pri izolácii buniek z rastlín a mikroorganizmov sa používajú špeciálne extrakčné postupy, ktoré využívajú mechanické aj chemické metódy. Tieto izolované bunky môžu byť imobilizované na pevnom podklade alebo môžu byť pasážované niekoľko generácií, aby sa vyvinuli do bunkovej línie.
Primárne bunkové kultúry sú prevažne dvoch typov; Adherentné bunkové kultúry a suspenzné bunkové kultúry. Adherentné primárne bunkové kultúry sú závislé od ukotvenia a vyžadujú pevnú podporu pre rast. Adherentné primárne bunkové kultúry pochádzajú hlavne z tkanív alebo orgánov. Suspenzné primárne bunkové kultúry sú nezávislé od ukotvenia a rastú v tekutom médiu. Suspenzné kultúry by sa mali počas rastovej fázy nepretržite miešať. Suspenzné primárne bunkové kultúry môžu byť priamo odvodené z krvi.
Primárne bunkové kultúry majú relatívne menšiu životnosť, ale informácie získané z primárnych bunkových kultúr v podmienkach in vitro poskytujú základný základ pre mnohé štúdie. Sú užitočné na štúdium charakteristík buniek, morfologického aj chemického správania.
Čo je bunková línia?
Bunkové línie sú široko používané vo výskume av súčasnosti sú na výskumné účely komerčne dostupné bunkové línie, ako sú rakovinové bunkové línie, pečeňové bunkové línie a obličkové bunkové línie. Bunkové línie sa pripravujú kontinuálnym pasážovaním primárnej bunkovej kultúry. Pasáž označuje proces subkultivácie, pri ktorom sa bunkové kultúry vyvinú do bunkovej línie. Tieto bunkové línie sú kultúry v dvojrozmerných alebo trojrozmerných matriciach a udržiavané ako bunkové línie.
Bunkové línie sú klasifikované ako konečné a kontinuálne bunkové línie. Konečné bunkové línie sa podrobia určitému počtu pasáží (20 – 30 pasáží). Po dokončení požadovaného počtu pasáží bunková línia vstúpi do štádia starnutia. S týmito bunkami sa ľahko manipuluje, pretože ich rast je definitívny. Kontinuálne bunkové línie sa tiež označujú ako imortalizované bunkové línie. Tieto bunkové línie nemajú presne stanovený počet pasáží. Rastú donekonečna, a preto sú schopné získavať mutácie. Preto sa kontinuálne bunkové línie ľahko mutujú, a preto sa menia ich morfologické a genetické charakteristiky, na rozdiel od konečných bunkových línií.
Obrázok 01: Bunkový riadok
Používajú sa bunkové línie, pretože je to pohodlnejšie ako použitie primárnej bunkovej kultúry, pretože ju možno počas určitého obdobia používať znova a znova. Ale je náchylnejší na mutácie a kontaminácie, pretože ich proliferácia sa zvyšuje.
Aké sú podobnosti medzi primárnou bunkovou kultúrou a bunkovou líniou?
- Typy buniek bunkovej kultúry aj bunkovej línie sa používajú vo výskume na štúdium morfologických, chemických a genetických charakteristík bunky.
- Bunečné kultúry aj typy buniek bunkovej línie sa extrahujú mechanickými a enzymatickými metódami.
- Typy buniek bunkových kultúr aj bunkových línií vyžadujú rastové médiá a špecifické rastové podmienky.
- Bunkové kultúry aj typy buniek bunkovej línie sú náchylné na mutácie.
Aký je rozdiel medzi primárnou bunkovou kultúrou a bunkovou líniou?
Primárna bunková kultúra verzus bunková línia |
|
| Primárna bunková kultúra je kultúra pripravená priamou izoláciou buniek mechanickými alebo enzymatickými metódami. | Bunková línia sa pripravuje kontinuálnym pasážovaním primárnej bunkovej kultúry, aby sa získala bunková línia, ktorá získala homológne znaky. |
| Počet priechodov | |
| Primárne bunkové kultúry nie sú pasážované, bunky sú udržiavané v kultivačných podmienkach. | Pri vytváraní bunkových línií sú bunky pasážované určite alebo neurčito. |
| Typy | |
| Adherentná primárna bunková kultúra a suspenzná primárna bunková kultúra sú dva typy primárnych bunkových kultúr. | Konečná bunková línia a kontinuálna bunková línia sú dva typy bunkových línií. |
| Životnosť | |
| Primárne bunkové kultúry majú krátku životnosť. | Bunkové linky majú dlhšiu životnosť. |
Súhrn – Primárna bunková kultúra verzus bunková línia
Primárne bunkové kultúry a bunkové línie sa široko používajú vo výskume na štúdium vzorcov správania rôznych buniek v rôznych podmienkach a pri rôznych farmakologických aspektoch. Primárne bunkové kultúry sú priamo izolované zo zdrojového orgánu alebo tkaniva a sú pestované na kultivačnom médiu. Podmienky sú optimalizované pre rast špecifických buniek. Bunkové línie sa na rozdiel od toho pripravujú pasážovaním primárnych bunkových kultúr konečný alebo nekonečný počet krát. Bunkové línie sú komerčne dostupné a sú medzi výskumníkmi obľúbené vďaka ľahkému použitiu.
