Kľúčový rozdiel – Gram Stain verzus kultúra
Gramovo farbenie je technika farbenia, ktorá sa používa na rozlíšenie baktérií do dvoch skupín podľa hrúbky peptidoglykánovej vrstvy v ich bunkovej stene. Kultúra je metóda pestovania a udržiavania mikroorganizmov v laboratórnych podmienkach na rôzne analýzy. Kľúčový rozdiel medzi gramovým farbivom a kultúrou je ich funkcia; gram kmeň je technika farbenia baktérií, kde kultivácia je spôsob pestovania a udržiavania mikroorganizmov.
Čo je Gram Stain?
Gramove farbenie je dôležitá technika diferenciálneho farbenia používaná na identifikáciu baktérií v mikrobiológii. Túto techniku zaviedol dánsky bakteriológ Hans Christian Gram v roku 1884. Gramovo farbenie kategorizuje baktérie do dvoch veľkých skupín: gram pozitívne a gram negatívne; tieto sú veľmi dôležité pri klasifikácii a identifikácii baktérií. Gramovo farbenie sa vykonáva ako počiatočný krok pre charakterizáciu baktérií.
Baktérie sú zoskupené na základe rozdielov v ich bunkovej stene. Gram pozitívne baktérie obsahujú vo svojej bunkovej stene hrubú peptidoglykánovú vrstvu, zatiaľ čo gramnegatívne baktérie obsahujú vo svojej bunkovej stene tenkú peptidoglykánovú vrstvu, ako je znázornené na obrázku 01. Výsledok farbenia podľa gramu bude založený na rozdiele hrúbky v peptidoglykánovej vrstve bunková stena.
Obrázok 1: Gram pozitívne baktérie a gramnegatívne baktérie
Gramsovo farbenie sa vykonáva pomocou štyroch rôznych činidiel, a to; primárne moridlo, moridlo, odfarbovacie činidlo a protimoridlo. Krištáľová violeť a safranín slúžia ako primárne a protiškvrny, zatiaľ čo gramy jódu a 95% alkoholu slúžia ako moridlo a odfarbovač.
Basic Steps of Grams Stain
- Na čistom sklíčku sa pripraví bakteriálny náter, zafixuje sa teplom a ochladí.
- Šmuh je zaplavený kryštálovou fialovou na 1 – 2 minúty.
- Ster sa opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu, aby sa odstránili prebytočné škvrny.
- Gramy jódu sa nanesú na náter na 1 minútu.
- Ster sa opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu
- Ster sa premyje 95% alkoholom po dobu 2 – 5 sekúnd a opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu.
- Ster je zafarbený safranínom počas 1 minúty
- Ster sa opláchne pomaly tečúcou vodou z vodovodu, vysuší sa a pozoruje sa pod mikroskopom.
Na konci gramového farbenia budú gramnegatívne baktérie pozorované ružovou farbou, zatiaľ čo grampozitívne baktérie budú pozorované fialovou farbou, ako je znázornené na obrázku 02. O výsledku gramového farbenia rozhoduje hrúbka peptidoglykánovej vrstvy v ich bunkovej stene. Počas odfarbovacieho kroku sa primárna škvrna a moridlo ľahko odstránia z gramnegatívnych baktérií a stanú sa bezfarebnými, pretože majú tenkú peptidoglykánovú vrstvu. Primárne sfarbenie je zadržané v grampozitívnych baktériách, pretože majú hrubú peptidoglykánovú vrstvu. Kontraškvrna nebude účinná pre grampozitívne baktérie v dôsledku zadržania primárneho zafarbenia. Takže grampozitívne baktérie budú viditeľné v primárnej farbe škvrny, t.j. fialovej farbe. Kontraškvrna zafarbí gramnegatívne baktérie a bude viditeľná vo farbe zberu, ktorou je safranínová farba. Preto je ľahké kategorizovať baktérie do dvoch skupín podľa gramového farbenia a je to cenné pri bakteriálnej diferenciácii a identifikácii.
Obrázok 2: Gramový kmeň
Čo je kultúra?
Mikrobiálna kultúra je metóda kultivácie a udržiavania mikroorganizmov v laboratórnych podmienkach na rôzne účely. Kultúry sa pestujú v pevných, polotuhých a tekutých médiách podľa typu a účelu kultivácie mikroorganizmov. Kultúry sú vybavené potrebnými živinami a rastovými podmienkami, ktoré mikroorganizmy vyžadujú. Existujú rôzne zložky kultivačného média, ako je zdroj energie, zdroj uhlíka, zdroj dusíka, minerály, mikroživiny, voda, stužujúce činidlo atď. Optimálna teplota, kyslík a pH by sa mali upraviť podľa typu pestovaného mikroorganizmu.
Existujú rôzne typy mikrobiálnych kultúr; napríklad vsádzková kultúra, kontinuálna kultúra, bodná kultúra, kultúra na agarovej platni, kultivácia v bujóne atď. Podľa zloženia rastového média existujú rôzne typy kultivačných médií známe ako syntetické médiá, polosyntetické médiá a prírodné médiá. Mikrobiálne kultúry sa pripravujú za sterilných podmienok v špeciálnej komore nazývanej laminárne prúdenie vzduchu. Rastové médium a sklenené nádoby sa pred naočkovaním požadovaného mikroorganizmu sterilizujú. Za vhodných sterilných podmienok sa cieľový mikroorganizmus prenesie do sterilizovaného živného média a inkubuje sa pri optimálnej teplote. Vo vnútri média bude mikroorganizmus rásť a množiť sa pomocou poskytnutých živín.
Obrázok 3: Bakteriálna kultúra na platni
Aký je rozdiel medzi Gram Stain a Culture?
Gram Stain vs Culture |
|
| Gramsov kmeň je technika diferenciálneho farbenia používaná na bakteriálnu diferenciáciu a identifikáciu. | Mikrobiálna kultúra je metóda pestovania mikroorganizmov v laboratóriu. |
| Components | |
| Toto používa rôzne reagencie vrátane dvoch škvŕn. | Toto používa rôzne kultivačné médiá, ako sú pevné, polotuhé a tekuté médiá zložené zo živín a iných nevyhnutných podmienok. |
| Základné funkcie | |
| To umožňuje zoskupiť baktérie do dvoch skupín: gramnegatívne a grampozitívne. | To umožňuje množenie mikroorganizmov na rôzne účely. |
| Základ | |
| Výsledok farbenia podľa Grama je založený na rozdieloch v peptidoglykánovej vrstve bunkovej steny. | Mikroorganizmy budú rásť a množiť sa v kultivačnom médiu. |
| Výsledok | |
| Gramnegatívne baktérie sú viditeľné ružovou farbou a grampozitívne baktérie sú viditeľné fialovou farbou. | Na tanieroch je možné vidieť kolónie mikroorganizmov. Na tekutých médiách sú mikroorganizmy v suspendovanej forme. |
Summary – Gram Stain vs Culture
Mikrobiálne kultúry sa pripravujú a udržiavajú v laboratórnych podmienkach na rôzne účely, ako je skladovanie, testovanie, chemické čistenie atď. Gramsovo farbenie je postup farbenia, ktorý rozlišuje baktérie do dvoch hlavných skupín nazývaných gramnegatívne baktérie a grampozitívne baktérie. Rozdiel medzi gramovým farbením a kultúrou je teda v tom, že gramové farbenie je technika farbenia baktérií, zatiaľ čo kultúra je metóda pestovania a udržiavania mikroorganizmov v laboratóriách.
