Kľúčový rozdiel medzi BL21 a DH5 Alpha je v tom, že BL21 je geneticky upravená kompetentná bunka E. coli s deficitom proteázy používaná predovšetkým na expresiu proteínov, zatiaľ čo DH5 Alpha je geneticky upravená kompetentná bunka E. coli s mutáciou recA1 používanou predovšetkým na plazmidovú transformáciu.
E. coli je jedným zo známych organizmov voľby na produkciu rekombinantných proteínov. V priebehu rokov sa stala najpopulárnejšou platformou na vyjadrovanie. Používa sa aj ako bunková továreň. BL21 a DH5 Alpha sú dve bunky E. coli upravené genetickým inžinierstvom, ktoré sa v súčasnosti používajú na expresiu proteínov a transformáciu plazmidov.
Čo je BL21?
BL21 je geneticky upravená kompetentná bunka E. coli s deficitom proteázy, ktorá sa primárne používa na expresiu proteínov. E. coli BL21 je bakteriálna bunka odvodená z kmeňa B. Má defekty Lon proteázy a ompT proteázy vonkajšej membrány. Bežne sa používa na expresiu rekombinantného proteínu, pretože normálne prináša stabilitu exprimovaným proteínom. BL21 je užitočný na expresiu proteínu s pCold I-IV DNA a pCold TF DNA. Ale táto kompetentná bunka E. coli nie je určená pre proteínový expresný systém využívajúci T7 promótor, ako je pET systém. Dôvodom je, že BL21 neexprimuje T7 RNA polymerázu. Navyše sa neodporúča používať na konštrukciu alebo prípravu plazmidu, pretože nemá recA mutáciu.
Obrázok 01: BL21
BL21 bol prvýkrát opísaný Studierom v roku 1986 po rôznych modifikáciách B línie. Bunky BL21 majú nedostatok proteázy LON, ktorá degraduje mnohé cudzie proteíny. Okrem toho mu chýba ďalší gén, ktorý kóduje proteázu vonkajšej membrány (OmpT), ktorej funkciou je degradovať extracelulárne proteíny. Nedostatok týchto proteínov spúšťa úspešnú produkciu cudzieho proteínu v bunkách E. coli BL21. Okrem toho mutácia hsdSB v týchto bunkách zabraňuje metylácii a narušeniu cudzej DNA v bunkách BL21.
Čo je DH5 Alpha?
DH5 Alpha je geneticky upravená kompetentná bunka E. coli s mutáciou recA1, ktorá sa primárne používa na transformáciu plazmidov. Bunky DH5 Alpha E. coli sú geneticky upravené americkým biológom Douglasom Hanahanom, aby sa maximalizovala účinnosť transformácie. Bunka DH5 Alpha má tri odlišné mutácie: recA1, endA1 a lacZAM15. recA1 je jednobodová mutácia, ktorá nahrádza glycín 160 a zvyšok kyseliny asparágovej v recA polypeptide. Táto mutácia deaktivuje aktivitu rekombináz a inaktivuje homológnu rekombináciu. mutácia endA1 inaktivuje vnútrobunkovú endonukleázu, ktorá jej bráni degradovať vložený plazmid.
Obrázok 02: DH5 Alpha
Navyše, mutácia lacZΔM15 umožňuje modro-biely skríning transformovaných buniek. Tieto bunky sú kompetentnými bunkami. Často sa používajú s transformáciou chloridom vápenatým na vloženie požadovaného plazmidu. Nedávny výskum zistil, že bunka DH5 Alpha s metódou Hanahan bola najúčinnejšou kompetentnou bunkou na transformáciu plazmidov.
Aké sú podobnosti medzi BL21 a DH5 Alpha?
- BL21 a DH5 Alpha sú dve geneticky upravené E.coli
- Obe sú kompetentné bunky.
- Pozostávajú z odlišných mutácií.
- Obaja nemajú prirodzené prostredie.
- Používajú sa na laboratórne účely, ako sú expresné štúdie a klonovacie postupy.
Aký je rozdiel medzi BL21 a DH5 Alpha?
BL21 je geneticky upravená kompetentná bunka E. coli s deficitom proteázy primárne používaná na expresiu proteínov. Na druhej strane, DH5 Alpha je geneticky upravená kompetentná bunka E. coli s mutáciou recA1 primárne používaná na transformáciu plazmidov. Toto je kľúčový rozdiel medzi BL21 a DH5 Alpha. Okrem toho bunka BL21 E. coli nemá mutáciu recA1, zatiaľ čo bunka DH5 Alpha E. coli má mutáciu recA1.
Nasledujúca infografika uvádza rozdiely medzi BL21 a DH5 Alpha vo forme tabuľky.
Zhrnutie – BL21 vs DH5 Alpha
Nepatogénne kmene E. coli sú geneticky vyvinuté vedcami na laboratórne štúdie expresie a klonovacie účely. BL21 a DH5 Alpha sú dve bunky E. coli upravené genetickým inžinierstvom. BL21 sa primárne používa na štúdie expresie proteínov. Na druhej strane sa DH5 Alpha primárne používa na účely transformácie plazmidov. Toto je zhrnutie rozdielu medzi BL21 a DH5 Alpha.
