Kľúčový rozdiel medzi kolorimetrickým a fluorometrickým testom je ten, že kolorimetrický test určuje koncentráciu farebných zlúčenín v roztoku, zatiaľ čo fluorometrický test určuje kinetický mechanizmus roztoku.
Biochemický test je technika, ktorá analyticky zisťuje alebo kvantifikuje aktivitu biologickej molekuly alebo látky. Ide o proces in vitro. Kolorimetrický test a fluorometrický test sú dva typy bežných biochemických testov vykonávaných v laboratóriách. Viaceré techniky, ako je ELISA a western blotting, sú tiež komplexné biochemické testy na kvantifikáciu metabolickej aktivity a meranie funkčného správania biomolekúl, ako sú proteíny, enzýmy a iné malé molekuly. Tieto typy testov sa používajú na identifikáciu interakcií proteín-DNA, proteín-RNA a proteín-proteín.
Čo je kolorimetrický test?
Kolorimetrický test je technika, ktorá určuje koncentráciu farebných zlúčenín v roztoku. Inými slovami, kolorimetrický test je reakcia, ktorá vedie k zmene farby v dôsledku enzymatickej alebo chemickej reakcie medzi činidlami a analytmi. Kolorimetrické testy sa praktizujú v biochémii na testovanie enzýmov, špecifických zlúčenín, hormónov, protilátok a iných analytov. Používajú kolorimetre alebo spektrofotometre. Kolorimetre sú prístroje, ktoré charakterizujú farebné vzorky s cieľom poskytnúť objektívne meranie farebných charakteristík. Spektrofotometer je zariadenie, ktoré meria intenzitu svetla ako funkciu farby alebo vlnovej dĺžky svetla.
Obrázok 01: Kolorimetrický test
Ako funguje kolorimetrický test?
V kolorimetrickom teste sa pripraví platňa s konkrétnou protilátkou naviazanou na jamky. Potom sa pridá vzorka. To môže umožniť vzorke naviazať sa na protilátku. Potom sa do jamiek pridá detekčná protilátka a substrát, aby reagovali s detekčnou sondou. Stop roztok sa pridá na konci pred odčítaním. Prázdna jamka nazývaná blank zostane bez vzorky. V kolorimetrickom teste platí, že čím tmavšia je farba, tým väčšia je koncentrácia analytu. Na odčítanie zvyčajne stačí iba jedna vlnová dĺžka. Ak však existuje referenčné meranie, použijú sa dve alebo viac vlnových dĺžok.
Čo je to fluorometrický test?
Fuorometrický test je technika, ktorá určuje kinetický mechanizmus enzýmových reakcií. Fluorometrický test sa uskutočňuje s tvorbou fluorescenčného produktu z nefluorescenčného substrátu alebo naopak. Tento test tiež využíva prenos energie fluorescenčnej rezonancie (FRET), kde enzymatická reakcia mení polohu dvoch fluorofórov v substráte, čím sa mení intenzita fluorescencie.
Obrázok 02: Fluorometrický test
Fluorometrické testy sú vo všeobecnosti oveľa citlivejšie ako iné testy. Odhady diagnostických enzýmov vo vzorkách tkanív, buniek alebo tekutín pacientov sa zvyšujú vďaka ich vyššej citlivosti.
Ako funguje fluorometrický test?
Pri fluorometrickom teste sa ku vzorke na doštičke pridá substrát a pomocou čítačky doštičiek sa meria fluorescenčná odpoveď. Tu sa každá bunka meria samostatne. Nepriehľadné platne sa používajú vo fluorometrických testoch. Tým sa znižuje rozptyl svetla. Pre tento typ testu sú potrebné dve vlnové dĺžky. Jedna vlnová dĺžka je určená na detekciu excitácie a druhá vlnová dĺžka je na emisiu.
Aké sú podobnosti medzi kolorimetrickým a fluorometrickým testom?
- Kolorimetrický test a fluorometrický test sú dva typy biochemických testov.
- Oba testy sa vykonávajú na účely lekárskej diagnostiky.
- Tieto testy zahŕňajú enzymatickú reakciu.
- Obe analýzy zahŕňajú substrát a analyty.
Aký je rozdiel medzi kolorimetrickým a fluorometrickým testom?
Kolorimetrický test je technika, ktorá určuje koncentráciu farebných zlúčenín v roztoku, zatiaľ čo fluorometrický test je technika, ktorá určuje kinetický mechanizmus enzýmových reakcií. Toto je kľúčový rozdiel medzi kolorimetrickým a fluorometrickým testom. Okrem toho sú fluorometrické testy citlivejšie ako kolorimetrické testy; takže fluorometrické testy majú schopnosť detegovať viac analytov. Toto je ďalší dôležitý rozdiel medzi kolorimetrickým a fluorometrickým testom. Okrem toho fluorometrické testy vyžadujú dve vlnové dĺžky, zatiaľ čo kolorimetrické testy sa vykonávajú s jednou vlnovou dĺžkou.
Nasledujúca infografika uvádza ďalšie rozdiely medzi kolorimetrickým a fluorometrickým testom.
Súhrn – kolorimetrický verzus fluorometrický test
Biochemický test je analytický proces používaný na stanovenie a kvantifikáciu bunkových metabolických reakcií. Kolorimetrický test a fluorometrický test sú dva typy biochemických testov. Kolorimetrický test je reakcia, ktorá vedie k zmene farby v dôsledku enzymatickej alebo chemickej reakcie medzi činidlami a analytmi, zatiaľ čo fluorometrický test je technika, ktorá sa používa na určenie kinetického mechanizmu enzýmových reakcií. Oba testy závisia od enzymatickej reakcie, ktorá zahŕňa substrát a analyt. Fluorometrické testy sú citlivejšie ako kolorimetrické testy. Najdôležitejšie je, že fluorometrické testy vyžadujú dve vlnové dĺžky, zatiaľ čo kolorimetrické testy je možné vykonávať iba s jednou vlnovou dĺžkou. Toto sumarizuje rozdiel medzi kolorimetrickým a fluorometrickým testom.
