Kľúčový rozdiel medzi elektroporáciou a mikroinjekciou je v tom, že elektroporácia je technika, ktorá využíva vysokonapäťový elektrický impulz na dodanie DNA do hostiteľských buniek, zatiaľ čo mikroinjekcia je technika, ktorá používa na dodanie DNA do buniek ihlu alebo mikropipetu s jemným hrotom. hostiteľské bunky.
Transformácia je proces, ktorým sa cudzia DNA prenáša do hostiteľských buniek. Transformáciou možno zmeniť genetickú výbavu organizmu. Existujú rôzne chemické, biologické a fyzikálne transformačné metódy. Niektoré sú priame metódy, zatiaľ čo iné sú nepriame metódy. Elektroporácia a mikroinjekcia sú dve fyzikálne metódy, ktoré sú metódami priamej transformácie. Elektroporácia využíva elektrické pole na vyvolanie mikroskopických pórov v biologických bunkových membránach s cieľom začleniť DNA do hostiteľských buniek. Mikroinjekcia, na druhej strane, priamo dodáva DNA pomocou mikropipety alebo sklenenej ihly s jemným hrotom.
Čo je elektroporácia?
Elektroporácia je transformačná technika, ktorá dodáva DNA do rastlinných buniek a protoplastov. Táto technika využíva vysokonapäťový elektrický impulz. Rastlinné materiály sa inkubujú v tlmivom roztoku s DNA. Potom sa roztok vystaví vysokonapäťovému elektrickému impulzu. V membránach rastlinných buniek sa vytvárajú póry indukované vysokým napätím a cez tieto póry DNA migruje do buniek a integruje sa s rastlinnou genómovou DNA. Účinnosť tejto metódy závisí od rastlinných materiálov a podmienok spracovania.
Obrázok 01: Elektroporácia
Keď sa transformácia vykonáva pomocou elektroporácie, iba 40 až 50 % buniek dostane DNA. Navyše iba 50 % transformovaných buniek môže prežiť touto metódou. Tento spôsob je však ľahko realizovateľný a nemení biologickú štruktúru alebo funkciu buniek. Navyše ho možno použiť pre širokú škálu buniek.
Čo je mikroinjekcia?
Mikroinjekcia je transformačná technika, ktorá je obzvlášť užitočná pri zavádzaní DNA do veľkých buniek. Táto metóda využíva sklenenú ihlu s jemným hrotom alebo mikropipetu na dodanie DNA do rastlinných protoplastov alebo živočíšnych buniek (oocyty, vajíčka a embryá). V skutočnosti je tento spôsob vhodnejší na výrobu transgénnych zvierat, ako sú myši. Pri tejto metóde je DNA inkorporovaná priamo do jadra alebo cytoplazmy.
Podobne ako elektroporácia, mikroinjekcia je priama transformačná technika. Mikroinjekcia sa vykonáva pod špeciálnym nastavením mikroskopu. Počítačové riadenie držiacej pipety, ihly, stolíka mikroskopu a video technológie zvýšilo účinnosť tejto techniky. Pri injekcii DNA možno použiť farbivo na jednoduchú identifikáciu transformovaných buniek. Preto nie je potrebné použiť samostatnú metódu na identifikáciu transformovaných buniek. Najdôležitejšie je, že postup mikroinjekcie nevyžaduje markerový gén.
Obrázok 02: Mikroinjekcia
Táto metóda je navyše veľmi efektívna a reprodukovateľná. Táto metóda je však nákladná, časovo náročná a vyžaduje si kvalifikovaného personálu. Touto metódou je tiež možné ošetriť len malý počet buniek.
Aké sú podobnosti medzi elektroporáciou a mikroinjekciou?
- Elektroporácia aj mikroinjekcia sú dva typy transformačných techník.
- Tieto metódy dodávajú DNA do rastlinných buniek a protoplastov.
- Sú to priame metódy.
- Okrem toho sú to fyzikálne alebo mechanické metódy.
- Obe metódy sú užitočné pri produkcii transgénnych rastlín a zvierat.
Aký je rozdiel medzi elektroporáciou a mikroinjekciou?
Elektroporačná technika využíva elektrické pole na zavedenie DNA, zatiaľ čo mikroinjekčná technika je mikropipeta alebo sklenená ihla s jemným hrotom na zavedenie DNA. Toto je kľúčový rozdiel medzi elektroporáciou a mikroinjekciou. Okrem toho sa elektroporácia väčšinou používa pre rastlinné bunky a protoplasty, zatiaľ čo mikroinjekcia sa väčšinou používa pre živočíšne bunky. Okrem toho elektroporácia nie je taká časovo náročná ako mikroinjekcia.
Nižšie uvedená infografika sumarizuje rozdiely medzi elektroporáciou a mikroinjekciou v tabuľkovej forme.
Zhrnutie – Elektroporácia verzus mikroinjekcia
Elektroporácia a mikroinjekcia sú dve fyzikálne metódy prenosu génov. Elektroporácia využíva vysokonapäťové elektrické pole, zatiaľ čo mikroinjekcia využíva sklenenú ihlu alebo mikropipetu. Toto je kľúčový rozdiel medzi elektroporáciou a mikroinjekciou. Obe metódy však priamo zavádzajú exogénnu DNA do hostiteľských buniek.
