Kľúčový rozdiel – prietoková cytometria vs FACS
V kontexte bunkovej teórie sú bunky základnou štrukturálnou a funkčnou jednotkou všetkých živých organizmov. Triedenie buniek je metodológia, ktorá sa používa na oddelenie rôznych buniek podľa fyziologických a morfologických vlastností. Môžu mať intracelulárne alebo extracelulárne vlastnosti. Interakcia DNA, RNA a proteínov sa považuje za intracelulárne interaktívne vlastnosti, zatiaľ čo tvar, veľkosť a rôzne povrchové proteíny sa považujú za extracelulárne vlastnosti. V modernej vede viedli metodológie triedenia buniek k podpore rôznych výskumov v biologických štúdiách a tiež pri vytváraní nových princípov prostredníctvom výskumu v medicíne. Triedenie buniek sa vykonáva na rôznych metodológiách, ktoré zahŕňajú primitívne s menším vybavením a pokročilé technologické metodiky s použitím sofistikovaných strojov. Prietoková cytometria, fluorescenčne aktivované triedenie buniek (FACS), magnetická bunková selekcia a triedenie jednotlivých buniek sú hlavné používané metodológie. Prietoková cytometria a FACS sú vyvinuté na diferenciáciu buniek podľa ich optických vlastností. FACS je špecializovaný typ prietokovej cytometrie. Prietoková cytometria je metodológia, ktorá sa používa pri analýze heterogénnej populácie buniek podľa rôznych molekúl bunkového povrchu, veľkosti a objemu, ktorá umožňuje skúmanie jednotlivých buniek. FACS je proces, pri ktorom sa zmes vzoriek buniek triedi podľa ich rozptylu svetla a fluorescenčných charakteristík do dvoch alebo viacerých nádob. Toto je kľúčový rozdiel medzi prietokovou cytometriou a FACS.
Čo je prietoková cytometria?
Prietoková cytometria je metóda, ktorá sa používa na skúmanie a stanovenie expresie intracelulárnych molekúl a bunkového povrchu a na definovanie a charakterizáciu rôznych typov buniek. Používa sa tiež pri určovaní objemu buniek a veľkosti buniek a pri hodnotení čistoty subpopulácií, ktoré sú izolované. To umožňuje viacparametrové vyhodnotenie jednotlivých buniek približne v rovnakom čase. Prietoková cytometria sa používa na meranie intenzity fluorescencie, ktorá vzniká vďaka fluorescenčne značeným protilátkam, ktoré pomáhajú identifikovať proteíny alebo ligandy, ktoré sa viažu na asociované bunky.
Obrázok 01: Prietoková cytometria
Prietoková cytometria vo všeobecnosti zahŕňa hlavne tri podsystémy. Sú to fluidiká, elektronika a optika. V prietokovej cytometrii je dostupných päť hlavných komponentov, ktoré sa používajú pri triedení buniek. Sú to prietoková kyveta (prúd kvapaliny, ktorá sa používa na ich prepravu a zarovnanie kyvet pre proces optického snímania), merací systém (môže byť z rôznych systémov vrátane ortuťových a xenónových výbojok, vysokovýkonných vodou chladených alebo vzduchom chladené lasery alebo diódové lasery s nízkym výkonom), ADC; Analógovo-digitálny konvertorový systém, zosilňovací systém a počítač na analýzu. Akvizícia je proces, pri ktorom sa údaje zbierajú zo vzoriek pomocou prietokového cytometra. Tento proces sprostredkúva počítač, ktorý je spojený s prietokovým cytometrom. Softvér prítomný v počítači analyzuje informácie privádzané do počítača z prietokového cytometra. Softvér má tiež schopnosť upravovať parametre experimentu ovládajúceho prietokový cytometer.
Čo je FACS?
V kontexte prietokovej cytometrie je fluorescenčne aktivované triedenie buniek (FACS) metóda, ktorá sa využíva pri diferenciácii a triedení vzorky zmesi biologických buniek. Bunky sú oddelené z dvoch alebo viacerých nádob. Metóda triedenia je založená na fyzikálnych vlastnostiach bunky, ktoré zahŕňajú rozptyl svetla a fluorescenčné charakteristiky bunky. Ide o dôležitú vedeckú techniku, ktorú možno využiť na získanie spoľahlivých kvantitatívnych a kvalitatívnych výsledkov fluorescenčných signálov, ktoré sú emitované z každej bunky. Počas FACS spočiatku vopred získaná zmes buniek; suspenzia je nasmerovaná do stredu úzkeho prúdu kvapaliny, ktorý rýchlo prúdi. Prúd kvapaliny je navrhnutý tak, aby oddeľoval bunky v suspenzii na základe priemeru každej bunky. Na prúd suspenzie je aplikovaný mechanizmus vibrácií, ktorý vedie k tvorbe jednotlivých kvapiek.
Obrázok 02: FACS
Systém je kalibrovaný tak, aby vytvoril jednu kvapku s jednou bunkou. Tesne pred tvorbou kvapiek sa prietoková suspenzia pohybuje pozdĺž prístroja na meranie fluorescencie, ktorý deteguje fluorescenčnú charakteristiku každej bunky. V mieste tvorby kvapiek sa umiestni elektrický nabíjací krúžok, ktorý sa pred meraním intenzity fluorescencie indukuje do krúžku. Akonáhle sa z prúdu suspenzie vytvoria kvapôčky, v kvapkách sa zachytí náboj, ktorý potom vstúpi do elektrostatického vychyľovacieho systému. Podľa nabitia systém odvádza kvapôčky do rôznych nádob. Spôsob aplikácie náboja sa líši podľa rôznych systémov používaných vo FACS. Zariadenie používané vo FACS je známe ako fluorescenčne aktivovaný triedič buniek.
Aká je podobnosť medzi prietokovou cytometriou a FACS?
Prietoková cytometria a FACS sú vyvinuté na diferenciáciu buniek podľa ich optických vlastností
Aký je rozdiel medzi prietokovou cytometriou a FACS?
Prietoková cytometria vs FACS |
|
| Prietoková cytometria je metodológia, ktorá sa používa pri analýze heterogénnej populácie buniek podľa rôznych molekúl bunkového povrchu, veľkosti a objemu, čo umožňuje skúmanie jednotlivých buniek. | FACS je proces, pri ktorom sa zmes vzoriek buniek triedi podľa ich rozptylu svetla a fluorescenčných charakteristík do dvoch alebo viacerých nádob. |
Súhrn – prietoková cytometria vs FACS
Bunka je základná štrukturálna a funkčná jednotka všetkých živých organizmov. Triedenie buniek je proces, ktorým sú bunky izolované a diferencované do rôznych kategórií na základe ich intracelulárnych a extracelulárnych vlastností. Prietoková cytometria a FACS sú dve dôležité metodológie pri triedení buniek. Oba procesy sú vyvinuté na diferenciáciu buniek podľa ich optických vlastností. Prietoková cytometria je metodológia, ktorá sa používa pri analýze heterogénnej populácie buniek podľa rôznych molekúl bunkového povrchu, veľkosti a objemu, ktorá umožňuje skúmanie jednotlivých buniek. FACS je proces, pri ktorom sa zmes vzoriek buniek triedi podľa ich rozptylu svetla a fluorescenčných charakteristík do dvoch alebo viacerých nádob. Toto je rozdiel medzi prietokovou cytometriou a FACS.
Stiahnite si PDF verziu prietokovej cytometrie vs FACS
Verziu tohto článku si môžete stiahnuť vo formáte PDF a použiť ju na offline účely podľa citácie. Stiahnite si PDF verziu tu Rozdiel medzi prietokovou cytometriou a FACS
