Kľúčový rozdiel medzi CLIA a ECLIA je v tom, že CLIA používa chemickú metódu na generovanie chemiluminiscencie, zatiaľ čo ECLIA používa elektrochemickú metódu na generovanie chemiluminiscenčných signálov v technike imunotestov.
Imunotesty sa široko používajú pri identifikácii a kvantifikácii proteínov spojených s chorobami alebo infekciami. Preto sa primárne spoliehajú na koncepciu väzby protilátka-antigén. Existuje mnoho typov imunotestov a jednou z takýchto nových vývojových techník sú chemiluminiscenčné imunotesty. CLIA aj ECLIA používajú chemiluminiscenčné indikátory.
Čo je CLIA?
Chemiluminiscenčná imunoanalýza (CLIA) je typ imunoanalýzy, ktorá využíva na detekciu luminiscenčnú molekulu. Luminiscencia emitovaná molekulou sa deteguje na spektrofotometri, vo všeobecnosti pri vlnovej dĺžke medzi 300 – 800 nm. Chemiluminiscencia spôsobuje excitáciu atómov a technika identifikuje exergonické chemické reakcie ako najvhodnejší zdroj energie na vyvolanie excitácie.
Technika CLIA prebieha v dvoch hlavných metódach ako priama technika CLIA a nepriama technika CLIA. Priama technika CLIA využíva priame luminoforové markery, ktoré sú naviazané na cieľ, zatiaľ čo nepriama metóda CLIA využíva enzymatické markery. Priame luminoforové markery zahŕňajú estery kyseliny a ruténia, zatiaľ čo nepriame markery zahŕňajú alkalickú fosfatázu so substrátom adamantyl-1,2-dioxetánarylfosfát (AMPPD) a chrenovú peroxidázu s luminolom alebo jeho derivátmi ako substrátom.
Obrázok 01: Chemiluminiscencia
Kľúčovými výhodami CLIA sú široký dynamický rozsah funkčnosti, vysoká intenzita dodania signálu, absencia rušenia pozadia, vysoká špecifickosť, rýchlosť, stabilita a kompatibilita s rôznymi protokolmi testov. Nevýhodou CLIA sú naopak ich vysoké náklady a obmedzenia týkajúce sa detekcie antigénu a testovacích panelov.
Čo je ECLIA?
Elektrochemiluminiscenčná imunoanalýza (ELCIA) je nová technika vývoja imunoanalýzy, ktorá využíva koncepciu elektrochemiluminiscencie. V koncepte elektroluminiscencie sa medziprodukty generujú elektrochemicky. Tieto elektronicky generované medziprodukty potom dosiahnu excitovaný stav a výsledkom je emisia svetla. Vlnová dĺžka, v ktorej je svetlo vyžarované, zodpovedá energetickej medzere. Chemiluminiscencia je teda produkovaná vďaka tomu, že jedna alebo viacero reaktantov sa vytvára elektrochemicky na elektróde.
ECLIA je užitočná analytická aplikácia s vysokou citlivosťou a špecifickosťou. Používa sa hlavne pri identifikácii proteínov súvisiacich s rôznymi patologickými a zdravotnými stavmi. Medzi jeho kľúčové výhody patrí širší dynamický rozsah, všestrannosť, priestorové a časové ovládanie aplikáciou elektródových potenciálov, vysoká citlivosť až pikomolárne rozsahy. Jeho nevýhodou je však to, že si vyžaduje odborné zaobchádzanie a vysoké náklady.
Aké sú podobnosti medzi CLIA a ECLIA?
- Obe techniky sa opierajú o koncept väzby antigén-protilátka.
- Oboje sa navyše používajú hlavne na diagnostiku chorôb na základe kvantifikácie bielkovín.
- Obe sú citlivé a špecifické metódy súpravy.
- Na detekciu používajú koncept chemiluminiscencie.
- Dajú sa automatizovať.
- Obe vyžadujú na detekciu spektrofotometer.
- Obe majú široký dynamický rozsah.
- Sú to nákladné techniky.
Aký je rozdiel medzi CLIA a ECLIA?
CLIA je technika imunoanalýzy, ktorá využíva teóriu chemiluminiscencie, zatiaľ čo ECLIA je technika imunoanalýzy, ktorá využíva teóriu elektrochémie spojenú s chemiluminiscenciou. Toto je kľúčový rozdiel medzi CLIA a ECLIA. Preto CLIA využíva chemické reakcie, ktoré vedú k rozvoju chemiluminiscenčných signálov, zatiaľ čo ECLIA využíva elektrochemické reakcie, ktoré vedú k vývoju chemiluminiscenčných signálov.
Nižšie uvedená infografika rozdielu medzi CLIA a ECLIA ukazuje viac porovnaní oboch techník.
Zhrnutie – CLIA vs. ECLIA
CLIA a ECLIA sú techniky, ktoré hrajú dôležitú úlohu v diagnostike chorôb. Sú to pokročilé metódy imunodiagnostiky založené na koncepte väzby protilátka-antigén. Kľúčový rozdiel medzi CLIA a ECLIA je spôsob generovania chemiluminiscencie. Zatiaľ čo CLIA využíva chemické reakcie na generovanie chemiluminiscencie po väzbe protilátka-antigén, ECLIA využíva elektrochemické reakcie na generovanie chemiluminiscencie. Obe techniky sú však rýchle a špecifické.
