Kľúčový rozdiel medzi GFP a EGFP je v tom, že GFP je proteín divokého typu začlenený do molekulárneho klonovania necicavčích buniek, zatiaľ čo EGFP je vylepšený alebo upravený typ GFP, ktorý možno použiť na cicavčích bunkách.
Molekulárne klonovanie je pokročilá technika, ktorú vedci nesmierne využívajú pri expresii proteínov prostredníctvom rekombinantnej technológie. V technológii rekombinantnej DNA je potrebné úspešne transformovať rekombinantný vektor na hostiteľský organizmus. Preto by sa počas procesu transformácie malo identifikovať a potvrdiť, či bol požadovaný gén transformovaný do hostiteľa alebo nie. Na posúdenie toho molekulárni biológovia používajú niekoľko techník. Jednou z týchto techník je reportérový gén. Tieto reportérové gény pôsobia ako selektovateľné markery na selekciu správnych transformantov. Zelený fluorescenčný proteín (GFP) a vylepšený zelený fluorescenčný proteín (EGFP) sú teda dva reportérové proteíny používané pri molekulárnom klonovaní.
Čo je GFP?
GFP je proteín divokého typu, ktorý obsahuje 238 aminokyselinových zvyškov a niekoľko voliteľných oblastí aminokyselinových sekvencií, ktoré ho odlišujú od ostatných fluorescenčných proteínov. Okrem toho bol tento proteín divokého typu pôvodne izolovaný z Aequorea Victoria; druh medúzy. Pri prírodných javoch však medúza dokázala produkovať zelenú fluorescenciu ako odpoveď na určité podnety.
Predtým tento koncept vedcov prekvapil a rozhodli sa ho použiť na svojich technológiách rekombinantnej DNA. V dôsledku toho vedci použili túto mutantnú formu génu divokého typu ako reportérový gén vo svojich štúdiách génovej expresie. Divoký typ génu GFP je schopný produkovať proteín, ktorý poskytuje fluorescenciu pri izbovej teplote alebo pod UV svetlom. Preto, keď je vložený do transformantov, exprimuje a produkuje fluorescenciu. Ak fluorescencia vznikne po procese transformácie, potvrdzuje to úspešnosť procesu transformácie. Jednoducho povedané, fluorescenčná emisia signalizuje úspešnú transformáciu vektora, ktorý prenáša požadovaný gén do hostiteľa.
Obrázok 01: GFP
Z tohto dôvodu GFP pôsobí ako in vivo marker génovej expresie. V súčasnosti sa na výrobu GFP používajú techniky genetického inžinierstva. K dispozícii sú aj mnohé vylepšené verzie GFP, ako napríklad EGFP. To umožňuje efektívne využitie GFP pri molekulárnom klonovaní a štúdiách génovej expresie.
Čo je EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein alebo EGFP je vylepšená verzia GFP. Jednoducho povedané, môžeme EGFP definovať ako upravenú verziu GFP divokého typu. Keď gén divokého typu GFP zmutuje, má priaznivé účinky. Mutovaný gén GFP teda umožňuje expresiu nových znakov a v dôsledku toho môžeme produkovať vylepšený GFP so zlepšenými vlastnosťami. Okrem toho môžeme úspešne zaviesť mutácie do génu GFP divokého typu pomocou ožarovania alebo chemických metód. Tieto mutované gény potom produkujú EGFP, ktorý má prospešnejšie vlastnosti.
Obrázok 02: EGFP
Vylepšené charakteristiky EGFP sú nasledovné;
- Schopný vyžarovať silnejšie fluorescenčné signály.
- Má vysokú citlivosť.
- Môže ho použiť na bunky cicavcov namiesto prokaryotov a iných eukaryotov nižšej úrovne.
- Poskytuje tiež zvýšenú čistotu produktu.
Preto v porovnaní s GFP je EGFP preferovanou voľbou pre štúdie génovej expresie. Produkt je však v porovnaní s GFP drahší.
Aké sú podobnosti medzi GFP a EGFP?
- GFP a EGFP sú dva proteíny, ktoré majú schopnosť vyžarovať zelenú farbu
- Preto oba fungujú ako reportérové proteíny v štúdiách génovej expresie.
- Oboje je tiež možné syntetizovať pomocou technológie rekombinantnej DNA.
- Okrem toho je ľahké ďalej mutovať tieto dva typy, aby sa syntetizovali vylepšené formy.
Aký je rozdiel medzi GFP a EGFP?
Reportérový gén je gén, ktorý sa spája s požadovaným génom v technológii rekombinantnej DNA. Signalizuje úspešnú transformáciu rekombinantného vektora na hostiteľa. Tu sú GFP a EGFP dva typy zelených fluorescenčných proteínov, ktoré fungujú ako reportérové proteíny. Kľúčový rozdiel medzi GFP a EGFP je však v tom, že GFP je divoký typ, zatiaľ čo EGFP je upravená verzia GFP. Okrem toho má EGFP prospešnejšie vlastnosti ako GFP. Napríklad EGFP produkuje silnejšie fluorescenčné svetlo a je citlivejší ako GFP. Ďalším rozdielom medzi GFP a EGFP sú systémy, v ktorých ich môžeme použiť. Systémy iných ako cicavcov používajú GFP, zatiaľ čo systémy cicavcov používajú EGFP.
Nižšie uvedená infografika predstavuje rozdiel medzi GFP a EGFP vo forme tabuľky.
Súhrn – GFP vs EGFP
GFP a EGFP sú reportérové proteíny v štúdiách molekulárneho klonovania a génovej expresie. GFP je proteín divokého typu, čo je zelený fluorescenčný proteín. Proteín bol spočiatku izolovaný od medúzy Aequorea victoria. Naproti tomu EFGP je vylepšená forma proteínu GFP. Je to mutant divokého typu so zlepšenými vlastnosťami. Preto má EFGP vyššiu silu signálu a vyššiu citlivosť. Preto ho môžeme použiť na cicavčích vektoroch. Na rozdiel od toho sa GFP používa hlavne na necicavčích vektoroch. Celkovo je to rozdiel medzi GFP a EGFP.
